【摘 要】
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人成纤维细胞生长因子21（humanfibroblastgrowthfactor21，hFGF21）已成为改善血糖和脂质代谢的候选药物，但却存在半衰期短和易被体内代谢等缺点，导致靶组织利用率低，限制了其临床应用。本研究通过柔性连接肽（GGGGS）3将hFGF21的N端连接至HSA的C端，经过毕赤酵母密码子优化后，将重组基因片段rHSA-hFGF21连入pPIC9k和pPICZαA两种载体，并转化到
【基金项目】
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江西省自然科学基金（20212BAB206094）； 河南省青年托举项目（2021HYTP042）； 河南省重大科技攻关项目（212102310242）；
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人成纤维细胞生长因子21（humanfibroblastgrowthfactor21，hFGF21）已成为改善血糖和脂质代谢的候选药物，但却存在半衰期短和易被体内代谢等缺点，导致靶组织利用率低，限制了其临床应用。本研究通过柔性连接肽（GGGGS）3将hFGF21的N端连接至HSA的C端，经过毕赤酵母密码子优化后，将重组基因片段rHSA-hFGF21连入pPIC9k和pPICZαA两种载体，并转化到X33、GS115和SMD1168三种不同酵母菌株中。通过加压筛选得到高表达的X33-pPIC9K-rHSA-hFGF21工程菌株，并优化摇瓶诱导条件如OD值、甲醇浓度和诱导时间进一步提高rHSA-hFGF21的表达效率。培养上清经中空纤维膜切向流技术粗分离、Blue亲和层析和Q离子交换层析纯化获得纯度约98.18%的rHSA-hFGF21蛋白。与hFGF21相比，rHSA-hFGF21具有更好的热稳定性和抗胰蛋白酶降解的能力，其血浆半衰期也延长了约27.6倍；中高浓度条件下rHSA-hFGF21刺激HepG 2细胞摄取葡萄糖的能力优于hFGF21；在2 型糖尿病动物中rHSA-hFGF21比hFGF21具有更好的长效降糖效果。本研究将为FGF21蛋白的大规模生产奠定基础。
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