论文部分内容阅读
目的
明确1例华法林高敏感患者细胞色素P450 2C9酶（CYP2C9）的新突变及其生物学功能。
方法提取患者基因组DNA，PCR产物利用直接测序法对CYP2C9、维生素K环氧化物还原酶复合物1（VKORC1）及细胞色素P450 4F2酶（CYP4F2）基因进行序列测定，与国际数据库比对分析确定是否存在碱基突变。通过定点诱变方法获得3种典型缺陷型CYP2C92、3、13及新突变型CYP2C9的cDNA，利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System试剂盒，获得高表达各型CYP2C9变异体的昆虫微粒体。Western印迹法进行CYP2C9蛋白定量，以甲苯磺丁脲为探针底物药，体外测定不同药物浓度下各型CYP2C9变异体的最大反应速率（Vmax）和米氏常数（Km），评价新突变类型对CYP2C9体外代谢活性的影响。
结果患者CYP2C9基因中发现全新的突变类型： 1400T>C，可导致CYP2C9第467位氨基酸发生变异（L467P），VKORC1及CYP4F2基因无碱基突变。体外代谢实验结果显示，突变体CYP2C92、3、13和L467P的体外酶学活性分别为野生型的91.58%、13.55%、0.11%和1.59%。
结论1400T>C突变可大大降低CYP2C9的体外酶学活性，提示携带此突变型的患者在使用经CYP2C9代谢的药物时，药物代谢速度会明显减慢，容易造成体内药物蓄积，发生潜在的药物不良反应。