小麦蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及重组酶性质

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目的:克隆小麦蛋白质二硫键异构酶(wheatproteindisulfideisomerase,wPDI)基因,实现其在大肠杆菌中的表达并探究其酶学性质。方法:以小麦种子总RNA为模板,逆转录并扩增得到wpdi,并以pET-30b为表达载体、大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌进行原核表达,表达产物经金属螯合层析纯化后进行了酶学性质研究。结果:克隆的基因全长1548bp,与“Wyuna”品种小麦wpdi基因相似性达99%。构建了pET-30b-wpdi表达载体,获得wPDI的最佳表达条件为:诱导温度22℃,
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