【摘 要】
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[目的]研究组蛋白三甲基化转移酶SETD2与肺腺癌的临床相关性及其在肺腺癌组织中的表达,探讨SETD2对肺腺癌细胞株A549和H1975增殖、迁移、侵袭能力及上皮—间充质转化（EMT）过程的影响。[方法]结合癌症基因组图谱数据库（TCGA）,分析SETD2的表达水平与肺腺癌患者总生存期（OS）的相关性。分别应用Real-time PCR和Western blot方法检测SETD2mRNA和蛋白在人
【机 构】
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苏州大学附属第三医院常州市第一人民医院
【基金项目】
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国家自然科学基金（81501971）； 中国博士后科学基金（2018M630603）； 江苏省自然科学基金（BK20150252）； 江苏省“六大人才高峰”基金（WSW-142）； 江苏省青年医学人才基金（QNRC2016279）；
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[目的]研究组蛋白三甲基化转移酶SETD2与肺腺癌的临床相关性及其在肺腺癌组织中的表达,探讨SETD2对肺腺癌细胞株A549和H1975增殖、迁移、侵袭能力及上皮—间充质转化（EMT）过程的影响。[方法]结合癌症基因组图谱数据库（TCGA）,分析SETD2的表达水平与肺腺癌患者总生存期（OS）的相关性。分别应用Real-time PCR和Western blot方法检测SETD2mRNA和蛋白在人肺腺癌组织芯片（包含12对肺腺癌组织标本）中的表达情况。构建慢病毒载体过表达Lv-SETD2-A549、Lv-SETD2-H1975稳转细胞株,沉默Si-SETD2-A549、Si-SETD2-H1975稳转细胞株及阴性对照组LvNC、Si-NC稳转细胞株。通过细胞计数试剂盒（CCK-8）法、细胞划痕和Transwell小室实验,分别检测过表达和沉默SETD2对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。采用Western blot方法比较4组细胞株中EMT相关蛋白上皮型钙黏附蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及正常对照组（GADPH）的表达水平差异;应用免疫荧光法检测4组间E-cadherin、Vimentin的表达水平。[结果] （1）SETD2表达与肺腺癌患者OS成正相关（P=0.014）。（2）SETD2mRNA和蛋白在肺腺癌组织中表达明显下降,且与临床分期明显相关（P=0.001）。（3）与Lv-NC组相比,A549和H1975在SETD2过表达组中SETD2mRNA和蛋白显著升高,细胞相对增殖活性（A549-0h:0.18±0.02,A549-24h:0.22±0.04,A549-48h:0.35±0.06,A549-72h:0.55±0.05;H1975-0h:0.21±0.02,H1975-24h:0.31±0.04,H1975-48h:0.43±0.03,H1975-72h:0.71±0.09）,细胞穿膜数（A549:54.00±11.23;H1975:57.13±10.28）均显著下降,迁移间距（A549:0.65±0.09;H1975:0.51±0.10）降低;这些指标,在SETD2沉默组中恰恰相反。（4）与阴性对照组相比,过表达SETD2可上调A549、H1975细胞株中E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平;这些指标在SETD2沉默组中则相反;免疫荧光实验结果显示过表达SETD2的A549和H1975组E-cadherin的红色荧光强度较Lv-NC组增强,而Vimentin的绿色荧光较Lv-NC组明显减弱。[结论] SETD2在肺腺癌组织中表达下降,SETD2低表达组患者OS较高表达明显下降。上调SETD2表达水平能够有效抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且逆转其发生EMT,抑制SETD2的表达则可诱导上述过程;SETD2可能发挥抑癌作用。
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