【摘 要】
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为建立动物A型流感病毒(Ⅳ)的重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对A型Ⅳ基质蛋白(M)基因保守序列设计了引物和探针,通过反应条件优化,建立了RPA-LF
【机 构】
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仲恺农业工程学院动物科技学院,广东广州510225广东省水禽健康养殖重点实验室,广东广州510225;佛山科学技术学院医药工程学院,广东佛山,528000;仲恺农业工程学院动物科技学院,广东广州,51
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为建立动物A型流感病毒(Ⅳ)的重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对A型Ⅳ基质蛋白(M)基因保守序列设计了引物和探针,通过反应条件优化,建立了RPA-LFD检测方法.特异性试验结果显示,该方法检测动物A型Ⅳ呈阳性,与新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、鸭肝炎病毒、小鹅瘟病毒等无交叉反应,特异性强;反应时间短、敏感性高,可以在35℃,20 min内检测到最低浓度为10拷贝/μL的重组质粒标准品.利用该方法对从化某活禽市场分离的鸭咽拭子样品共50份进行检测,结果3份为阳性,其余均为阴性,与PCR及病毒分离结果一致,准确性高.本研究首次建立了检测动物A型Ⅳ的可视化RPA-LFD检测方法,该方法不依赖任何仪器设备,操作简单、快速,可为基层实验室临床快速检测和流行病学研究提供帮助.
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