【摘 要】
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用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法研究ＤＬＡⅡ类基因，包括１１只分别为８个不同ＤＬＡ单倍型的纯合子参考狗，和两个犬家族各８只狗。用引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ａｍＰＡ／Ｂ扩增其基因组ＤＮＡ，获得２７４ｂｐ扩增产物。该产物被３２个能识别ＤＬＡ－ＤＲＢ区等位基因变异的、不同的内切酶酶解
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用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法研究ＤＬＡⅡ类基因，包括１１只分别为８个不同ＤＬＡ单倍型的纯合子参考狗，和两个犬家族各８只狗。用引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ａｍＰＡ／Ｂ扩增其基因组ＤＮＡ，获得２７４ｂｐ扩增产物。该产物被３２个能识别ＤＬＡ－ＤＲＢ区等位基因变异的、不同的内切酶酶解，只有ＨａｅⅡ、ＨｈａＩ、ＨｌｎｆＩ、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ和Ｓａｕ９６Ｉ酶解后分别显示出高度的多态性，被归类为９个不同的ＲＦＬＰ带型，分别与所研究的ＤＬＡ单倍型及８个细胞学确定的ＤＬＡ－Ｄ特异性相关联。对两个犬家族的分离研究证实了ＲＦＬＰ带型的分型价值。因此上述引物对和内切酶构成了一个实用的分型系统，能对ＤＬＡＤＲＢ１基因进行ＰＣＲ－ＲＰＬＰ分型。
DLA class II genes were studied by PCR-RFLP, including 11 homozygous reference dogs with 8 different DLA haplotypes and 8 dogs from each of two dog families. The genomic DNA was amplified with primers for HLA-DRB-amPA / B to obtain a 274 bp amplification product. This product was digested by different endonucleases that recognized allelic variations in the DLA-DRB region. Only the HaeII, HhaI, HlnfI, MspI, RsaI, and Sau96I digests showed high degree of polymorphism, respectively Were grouped into nine different RFLP bands associated with DLA haplotypes studied and eight cytologically defined DLA-D specificities, respectively. The isolation of two canine families confirmed the typing value of RFLP bands. Therefore, the primer pair and the endonuclease constitute a practical typing system capable of performing PCR-RPLP typing on the DLADRB1 gene.
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