【摘 要】
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目的:分析成骨细胞分泌的Wnt蛋白对于骨质重塑和骨髓间充质干细胞(BMSCs)的维持的调控作用.方法:取Wls基因条件敲除小鼠,Col2-Cre转基因小鼠,以及两者交配繁殖小鼠,分别在胚
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目的:分析成骨细胞分泌的Wnt蛋白对于骨质重塑和骨髓间充质干细胞(BMSCs)的维持的调控作用.方法:取Wls基因条件敲除小鼠,Col2-Cre转基因小鼠,以及两者交配繁殖小鼠,分别在胚胎期、出生后取肢牙、成骨等进行镜检、病理检验、免疫组化分析,另做Col2-Cre转基因小鼠成熟成骨细胞Wls基因敲除,也进行病理检验、成骨免疫组化分析.结果:野生型的小鼠在增殖软骨、肥大软骨中Wnt2b、Wnt4、Wnt10b、Wnt5a、Wnt5b、Wnt11均明显表达;支配繁殖小鼠胚胎期增殖软骨与软骨Brdu阳性细胞减少,TUNEL染色提示股骨近端出现凋亡信号,野生型无凋亡信号,在6-7日个体更小,出生后1-2周死亡率85％(17/20);交配繁殖小鼠肋骨变短,基枕骨、基蝶骨发育异常,头骨闭合延迟,骨化区域变小,Alcian Blue着色区域软骨区长度正常,SafraninO染色显示,整根骨较Wls基因条件敲除小鼠更粗,成骨形成区长度更短,增殖软骨细胞排列致密性稍差,Von Kossa染色交配繁小鼠骨膜处矿化、细胞分化延迟,交配小鼠繁殖肥大软骨的宽度明显变窄;Col2-Cre转基因小鼠在成熟成骨细胞中敲除Wlsclc小鼠成熟后前4个月无明显的个头变化、体重减轻,敲除Wlsclc对骨质无限制影响;野生型、Col2-Cre转基因小鼠成骨细胞中敲除Wlsclc小鼠的骨髓中BMSC比例、BMSCs绝对数量、培养第3代贴壁生长率均高于两种变异小鼠交配繁殖;CFU-F实验显示,两种变异小鼠交配繁殖骨髓间充质干细胞或成骨前体细胞形成克隆的数量减少,Col2-Cre转基因小鼠成熟的成骨细胞中敲除Wlsclc,BMSCs指标无显著变化,BMSc或者成骨前体细胞形成克隆的数量无显著减少.结论:成骨细胞分泌的Wnt蛋白对骨质重塑和骨髓间充质干细胞存在显著影响,可能在胚胎期便发生作用,对BMSCs分化有显著影响,存在促分化作用.
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