【摘 要】
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目的:利用免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因,建立一种经济、有效、快捷的miRNA靶基因鉴定方法。方法:直接提取细胞总RNA后加入生物素标记的miRNA分子共孵育,而后利用免疫磁珠分离
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目的:利用免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因,建立一种经济、有效、快捷的miRNA靶基因鉴定方法。方法:直接提取细胞总RNA后加入生物素标记的miRNA分子共孵育,而后利用免疫磁珠分离与miRNA结合的mRNA,或将生物素标记的miRNA分子瞬时转染HeLa或HepG2细胞,48h后裂解细胞并在离心后应用链霉亲和素磁珠分离与miRNA特异性结合的mRNA。将分离获得的mRNA反转录获得cD-NA,并以其为模板,以特异性引物和Oligo(dT)进行PCR扩增,而后经过克隆测序,通过生物信息学方法比对测序结果,鉴定miRNA的靶基因。结果:利用已知的let-7靶基因证实了上述方法的有效性,并通过该方法鉴定出let-7的一个新的靶基因。结论:建立了免疫磁珠分离鉴定miRNA靶基因方法,为miRNA靶基因的研究提供新的实验学方法。
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