人颗粒溶素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡、线粒体跨膜电位及细胞色素C释放的影响

来源 :中华肝脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Stephanie1121
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目的 构建携带人颗粒溶素(GLS)的真核表达质粒pBudCE4.1/GLS并研究其表达后对肝癌细胞SMMC-7721凋亡、线粒体跨膜电位与细胞色素C转位的影响. 方法 将RT PCR扩增出的人GLS编码基因克隆入pBudCE4.1载体中构建真核表达质粒pBudCE4.1/GLS并将其转染肝癌细胞株SMMC-7721,用RT-PCR、免疫细胞化学检测GLS的表达;用Hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况;用荧光染料MitocaptureTM检测线粒体跨膜电位,用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放. 结果 成功构建了携带GLS的真核表达质粒pBudCE4.1/GLS,在转染的肝癌细胞株SMMC-7721中,从转录和翻译水半都检测到了目标基因GLS的表达产物;重组质粒转染SMMC-7721细胞后,细胞核染色质固缩,旱致密浓染的凋亡状态,线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放. 结论携带人GLS的真核表达质粒在肝癌细胞SMMC-7721中表达后有致细胞凋亡作用,引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一。

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