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目的 构建表达人黑色素瘤相关抗原D4a(MAGE-D4a)基因的重组腺病毒载体并进行鉴定.方法 从胶质瘤细胞系中用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法得到MAGE-D4a基因全长片段,将其导入T载体进行测序,得到准确的序列后再导入腺病毒穿梭质粒中.将穿梭质粒和病毒骨架通过电穿孔导入细菌内进行重组,挑选阳性克隆,提取重组后的质粒,用脂质体法将其在体外转染入HEK293细胞,并在细胞内部包装.扩增收集重组腺病毒Ad-MAGE-D4a,RT-PCR方法检测其体外表达,并用倍比稀释感染法测定腺病毒的滴度.结果 MAGE-D4a基因被导入带有绿色荧光的腺病毒载体中,PCR检测证实其在转染后的HEK293细胞中表达,病毒滴度为2× 108 pfu/ml.结论 成功构建表达人MAGE-D4a基因的重组腺病毒载体,有效转染HEK293细胞并进行基因表达。