【摘 要】
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目的建立检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal am-plification,LAMP)方法。方法根据GenBank中登录的猪肺炎支原体的核
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院; 讷河市畜牧水产推广中心;
【基金项目】
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大庆市科学技术局项目(SGG2007-048)
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目的建立检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal am-plification,LAMP)方法。方法根据GenBank中登录的猪肺炎支原体的核苷酸序列,设计4条特异性引物,用外引物进行PCR反应,对内外引物浓度、dNTP+和MgSO4浓度及Bst DNA聚合酶用量等进行优化,建立猪肺炎支原体LAMP检测方法,并对该方法进行特异性和敏感性验证。结果内外引物浓度分别为0.5和0.20 pmol/μl,dNTP+浓度为0.5 mmol/L,MgSO4浓度为3.75 mmol/L,Bst DNA聚合酶用量为8.0和9.6 U时,LAMP反应效果较好;应用该方法检测多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、肺炎双球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和链球菌均呈阴性;当猪肺炎支原体的拷贝数低于3时,检测不到该病原体。结论已建立了猪肺炎支原体LAMP检测方法,该方法特异性较好,敏感性较高。
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