基于超速离心法的外泌体分离和鉴定方法的优化分析

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目的 确定一种简单可靠的外泌体纯化方法。方法 对分离外泌体的常用方法超速离心法(UC)进行优化,建立了3种优化方法,并通过负染透射电镜、NanoSight、蛋白质浓度和蛋白质印迹进行比较以评估基于超速离心法的3种分离方法。结果 电镜结果显示,方法 3(protocol 3)分离到的外泌体具有类似茶托样的结构,颗粒直径为30~150 nm。NanoSight、蛋白质浓度和蛋白质印迹结果显示,相较于其他2种方法,方法 3获得的外泌体颗粒数量更多,方法 3的外泌体CD63、CD81表达量[(3.72±0.52),(3.26±0.14)]均明显高于方法 1[(1.00±0.00),(1.00±0.00)]和方法 2[(1.16±0.32),(0.66±0.24)],且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 优化后的方法可以有效地收获外泌体。
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