【摘 要】
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目的 前期研究发现脾虚证患者的肠道菌群发生显著变化，针对其中丰度明显改变的艾克曼菌ATCC BAA-835（Akkermansia muciniphila ATCC BAA-835,AKK）和单形拟杆菌（Bacteroides uniformis,BU）建立实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,QPCR）检测方
【基金项目】
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国家自然科学基金委员会青年项目（81803990）:补中益气汤经肠道菌群的调控作用治疗脾虚证的分子机制研究，负责人：彭颖；
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目的 前期研究发现脾虚证患者的肠道菌群发生显著变化，针对其中丰度明显改变的艾克曼菌ATCC BAA-835（Akkermansia muciniphila ATCC BAA-835,AKK）和单形拟杆菌（Bacteroides uniformis,BU）建立实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,QPCR）检测方法，通过体外孵育和体内动物实验考察补中益气汤对其的影响。方法 采用模拟人体胃肠道代谢方法，将补中益气汤水煎剂与人工胃/肠液孵育后，与健康人群/脾虚证患者粪便共孵育，将粪便样品、24 h孵育样品进行微生物多样性测序；筛选AKK和BU特异性引物并建立其QPCR分析方法，检测补中益气汤与健康人群/脾虚证患者粪便共孵育后AKK和BU菌不同时间点的动态变化；采用番泻叶灌胃塑造脾虚证小鼠模型并给予补中益气汤治疗，考察补中益气汤对脾虚证小鼠体内AKK和BU菌含量的影响。结果 测序结果表明，健康人群和脾虚证患者肠道菌群结构存在明显差异，补中益气汤对粪便孵育液中肠道微生物具有一定的调节作用。方法学考察结果表明，建立的AKK和BU的QPCR定量检测方法重复性、稳定性良好，定量结果可靠。补中益气汤体外与健康人群/脾虚证患者粪便共孵育，其中AKK和BU呈现动态变化过程，其对健康人群/脾虚证患者粪便中AKK和BU均具有一定影响。孵育24 h，补中益气汤对脾虚证患者粪便样本中的AKK菌无显著影响，但可显著降低脾虚证患者粪便中BU菌含量（P<0.01）并恢复至健康人的水平。体内动物实验结果表明，补中益气汤体内可显著增加脾虚证小鼠粪便样本中AKK菌含量（P<0.01）并降低BU菌含量（P<0.01）。结论补中益气汤体内外可直接调节BU菌含量，降低BU菌含量可能是其治疗脾虚证的分子作用机制之一。
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