【摘 要】
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目的 构建黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)相关的HBV感染肝细胞模型,为研究DNA识别受体在肝细胞内固有免疫的炎症作用提供媒介.方法 从4种细胞系中筛
【机 构】
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中山大学附属第三医院感染科肝病实验室,广东广州,510630
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目的 构建黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)相关的HBV感染肝细胞模型,为研究DNA识别受体在肝细胞内固有免疫的炎症作用提供媒介.方法 从4种细胞系中筛选出AIM2和cGAS相对表达高的细胞系.通过慢病毒转染构建稳定过表达钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)的该细胞系.超离和纯化的方法获取高纯度高HBV病毒量的血清液,用该血清培养细胞系,3 d后通过罗氏PCR方法测定细胞上清HBV病毒量,ELISA方法测定细胞上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg).结果 Western blot及rtPCR结果显示4种细胞系中7721细胞系的AIM2和cGAS均高表达,其中AIM2的mRNA在各细胞系组间差异有统计学意义(P0.05).成功构建稳定过表达NTCP的7721细胞系后,感染病毒3 d后细胞上清可检测出HBV病毒和HBsAg阳性,HBeAg阴性.结论 HBV感染的7721细胞系构建成功,可利用该细胞系进行AIM2和cGAS在肝细胞内固有免疫相关研究.
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