【摘 要】
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目的 测定贵阳地区一株甲型副伤寒沙门菌(Salmonella enterica paratyphi A)所带3.6kb质粒的全序列,以确定其是否带有抗性基因.方法 从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐
【机 构】
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山东省济宁市第一人民医院检验科,山东,济宁,272100贵阳医学院临床生化教研室,贵阳,550004;
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目的 测定贵阳地区一株甲型副伤寒沙门菌(Salmonella enterica paratyphi A)所带3.6kb质粒的全序列,以确定其是否带有抗性基因.方法 从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐药谱最广的菌株,选择一株含抗药性最多的甲型副伤寒沙门菌,检测的标本来自于患者血平板标本.通过药敏试验筛查,并对甲型副伤寒沙门菌的耐药谱特征比较,提取其质粒(plasmid),用Sau3A I限制性核酸内切酶消化、酶切消化的一个片段克隆到pMD-18T、用引物M13/R测序.再通过反向PCR技术,扩增余下质粒片段并进行测序,作BLSAT(basic local alignment search tool)比较分析,测定其所含质粒的全部序列并预测开放阅读框(open reading frame, ORF).将序列提交GenBank.结果 该菌对卡那霉素(kana)、头孢氨苄(cefa)、四环素(tet)、氯霉素(cal)、复方磺胺(sul)、青霉素(pnc)等6种抗生素耐药.通过测序获得了一个长度为3592bp质粒的基因全序列;并预测含有3个ORF;不带有抗性基因,提交到GenBank保存,并且应用相应软件绘出了它的物理图谱.结论 多药耐药的甲型副伤寒沙门菌为临床分离株,抗性基因定位在于染色体上.不在以往学者怀疑的3.6kb质粒上,通过BLAST分析,该质粒为隐蔽质粒、功能未知.该质粒与鼠疫伤寒沙门菌质粒序列有41%的高度相似.结果 显示,此株甲型副伤寒沙门菌的抗性基因存在染色体上.
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