【摘 要】
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目的 探寻内含子来源的长链非编码RNA(lncRNA)SOS1?IT1对肝癌细胞的影响及分子机制.方法 用人肝癌细胞系QGY?7703作为细胞模型,CCK?8实验检测细胞活性,EdU实验检测细胞DNA复制活性.生物信息学预测RNA序列中的miR?124潜在结合位点(MRE).用真核表达质粒pcDNA3.1(+)作为SOS1?IT1及其MRE,以及miR?124的过表达载体.将MRE克隆插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的编码区下游,构建荧光报告基因质粒.荧光报告基因实验检测miR?124对MRE序列的特异
【机 构】
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天津市儿童医院(天津大学儿童医院)消化科,天津300134;天津市第一中心医院国家卫生健康委员会危重病急救医学重点实验室,天津300192
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目的 探寻内含子来源的长链非编码RNA(lncRNA)SOS1?IT1对肝癌细胞的影响及分子机制.方法 用人肝癌细胞系QGY?7703作为细胞模型,CCK?8实验检测细胞活性,EdU实验检测细胞DNA复制活性.生物信息学预测RNA序列中的miR?124潜在结合位点(MRE).用真核表达质粒pcDNA3.1(+)作为SOS1?IT1及其MRE,以及miR?124的过表达载体.将MRE克隆插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的编码区下游,构建荧光报告基因质粒.荧光报告基因实验检测miR?124对MRE序列的特异性结合和调控.结果 在人肝癌QGY?7703细胞系中,过表达lncRNA SOS1?IT1能够增强细胞的活性[(1.184±0.114)vs.(0.928±0.104),P<0.05]并加速DNA复制[(0.625±0.013)vs.(0.206±0.016),P<0.05],抑制SOS1?IT1则降低细胞活性[(0.648±0.062)vs.(0.870±0.091),P<0.05]并减缓DNA复制[(0.126±0.022)vs.(0.271±0.033),P<0.05].生物信息学预测发现,SOS1 mRNA及SOS1?IT1分别包含3个和1个潜在的miR?124的MRE.荧光报告基因实验确定,SOS1 mRNA的前2个MRE,以及SOS1?IT1的MRE均为miR?124的有效结合位点.用包含SOS1?MRE的荧光报告基因质粒转染QGY?7703细胞,同时表达SOS1?IT1的MRE能够增强荧光强度[(3.68±0.315)vs.(2.71±0.180),P<0.05].进一步过表达miR?124后,荧光强度发生回落[(1.09±0.143)vs.(4.04±0.079),P0.05].结论 内含子来源的lncRNA SOS1?IT1能够与宿主基因SOS1竞争性结合细胞内源性miR?124,通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制促进SOS1的表达,并促进肝癌细胞的活性和DNA复制.
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