【摘 要】
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目的 研究莪术醇抗T47D乳腺癌细胞增殖的作用机制.方法 采用MTT法检测不同剂量莪术醇(0、6.25、12.5、25、50、100 μg/mL)对T47D乳腺癌细胞增殖的抑制作用.以莪术醇(12.5、25、50、100 μg/mL)干预T47D乳腺癌细胞后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态;采用流式细胞仪检测细胞周期及活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期调控因子p21和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的mRNA表达水平;采用We
【机 构】
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桂林医学院药学院生药学重点实验室,广西桂林541100;桂林医学院药学院生药学重点实验室,广西桂林541100;桂林医学院基础医学院,广西桂林541100
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目的 研究莪术醇抗T47D乳腺癌细胞增殖的作用机制.方法 采用MTT法检测不同剂量莪术醇(0、6.25、12.5、25、50、100 μg/mL)对T47D乳腺癌细胞增殖的抑制作用.以莪术醇(12.5、25、50、100 μg/mL)干预T47D乳腺癌细胞后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态;采用流式细胞仪检测细胞周期及活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期调控因子p21和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的mRNA表达水平;采用Westem blot法检测CDK2、CDK6、细胞周期蛋白D(Cyclin D)、PCNA、核转录因子E2-相关因子(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)的蛋白表达水平.另将细胞分为2组,其中一组加入不同剂量莪术醇,另外一组加入33 μg/mL莪术醇干预6、12、24、48h,根据以上2组结果确定最佳氧化时间和给药浓度后,另设空白对照组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(单用ROS抗氧化剂NAC)、莪术醇组(单用莪术醇)、莪术醇联合NAC组(采用ROS抗氧化剂NAC预处理,再加入莪术醇),检测细胞周期及ROS荧光强度.结果 莪术醇能使T47D乳腺癌细胞增殖抑制率显著升高(P＜0.05或P＜0.01),并呈一定的剂量和时间依赖趋势.莪术醇能将T47D乳腺癌细胞周期阻滞于G1期,并使ROS水平显著增加(P＜0.05或P＜0.01);ROS抗氧化剂NAC能够逆转莪术醇的上述诱导作用(P＜0.01).qRT-PCR结果显示,莪术醇能下调PCNA和CDK2 mRNA的表达,并上调p21 mRNA的表达(P＜0.05或P＜0.01).Western blot结果显示,莪术醇能显著下调Keap1、Nrf2、CDK2、CDK6和CyclinD的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01);ROS抗氧化剂NAC能够逆转莪术醇对上述蛋白表达的下调作用(P＜0.05或P＜0.01).结论 莪术醇可能通过诱导氧化应激和细胞周期阻滞,发挥抑制T47D乳腺癌细胞增殖的作用.
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