目的 研究小干扰RNA(siRNA)沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)基因在滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡调控中的作用,为进一步研究PADI4在RA发病机制中的作用奠定基础.方法 设计并合成2对针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链,通过脂质体介导将siRNA转入RA-FLS细胞中,作用48 h后收集FLS细胞,抽提RNA逆转为cDNA,并提取FLS细胞蛋白质,通过荧光定量PCR、蛋白印迹技术,确定siRNA成功干扰PADI4表达后,比较siRNA实验组FLS细胞和对照组FLS细胞凋亡率,细胞周期调控蛋白CyclinB1和P21的表达量.收集细胞培养液,ELISA法测定IL-1β.所有数据采用配对t检验进行分析.结果 所设计的针对PADI4的siRNA成功干扰PADI4在FLS中的表达,空白对照组(si-NC)中PADI4 mRNA水平为1.00±0.20,si-944和si-1225干扰组分别为0.38±0.20(t=9.607,P＜0.01)和0.39±0.23 (t=8.394,P＜0.01);FLS中与对照组细胞凋亡率(1.6±0.3)％相比,si-944和si-1225干扰组分别为(5.4±0.6)％(t=-19.223,P＜0.01),(6.1±0.6)％(t=-24.229,P＜0.01),细胞凋亡明显增加.siRNA转染组细胞周期蛋白CyclinB1表达下降,P21表达上升.与对照组IL-1β水平(23.9±0.7) ng/ml相比较,si-944和si-1225干扰组IL-1β分泌增多[分别为(26.8±0.7) ng/ml,(27.7±0.7) ng/ml;t=-10.747,-10.967,P均＜0.01).结论 PADI4在FLS细胞凋亡中起着重要的调控作用,可能在RA的发病中起着一定的作用。
小干扰RNA沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响
【摘 要】
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目的 研究小干扰RNA(siRNA)沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)基因在滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡调控中的作用,为进一步研究PADI4在RA发病机制中的作用奠定基础.方法 设计并合成2对针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链,通过脂质体介导将siRNA转入RA-FLS细胞中,作用48 h后收集FLS细胞,抽提RNA逆转为cDNA,并提取FLS细胞蛋白质,通过荧光定量PCR、蛋白印迹技术
【机 构】
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200120上海,同济大学附属东方医院检验科,200120上海,同济大学附属东方医院检验科,200120上海,同济大学附属东方医院检验科,200120上海,同济大学附属东方医院检验科,200120上海
【出 处】
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中华风湿病学杂志
【发表日期】
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2014年18期
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