论文部分内容阅读
妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus，GDM)可导致胎肺成熟障碍，引起新生儿呼吸窘迫综合征(respiratory distress syndrome，RDS)，但具体机制尚不清楚。而肺发育成熟需要多种转录因子、生长因子和其他信号分子协调发挥作用，其中 FOXA2又名肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor，HNF)3B，是翼螺旋转录因子叉头框(forkhead box，FOX)，可调控肺II型上皮细胞分化及表面活性物质合成。一些研究发现在胰岛素抵抗或高胰岛素血症小鼠肝脏中，胰岛素受体激活，活化磷脂酰肌醇，Akt/PKB直接使FOXA2磷酸化，导致FOXA2被细胞核排出，FOXA2失活并持续定位于细胞质中，抑制其转录活性；另外研究也发现过多的ROS/RNS，可使FOXA2亚硝基化，促进其降解。而妊娠期糖尿病胎儿处于高血糖、高胰岛素、高NO等不良环境中，胎肺发育延迟是否由于上述因素引起FOXA2发生磷酸化、硝基化等修饰，其转录活性下降，进而影响肺发育？本课题就此研究 FOXA2在妊娠期糖尿病中对肺上皮细胞分化及表面活性蛋白表达的分子机制，进一步揭示了FOXA2在肺发育中作用，同时为防治 GDM胎肺发育障碍提供新的作用靶点。 [目的]探讨妊娠糖尿病孕鼠胎鼠肺发育状况及 FOXA2在 GDM中对胎肺 II型上皮细胞发育及肺表面活性蛋白（SPB,SPC）影响及其可能机制。 [方法] 1.将SPF级妊娠SD大鼠20只随机分2组，即GDM组(于孕第2天腹腔注射链脲佐菌素)10只和对照组(不做任何处理)10只，妊娠21天时取胎肺； 2.应用ELISA测定血清中胰岛素含量及羊水中SP-B、SP-C水平； 3.采用光镜和电镜观察胎鼠肺的形态和超微结构； 4.采用免疫组化或免疫荧光检测胎肺组织中SP-B、SP-C、foxa2水平； 5.Western blot检测大鼠胎肺组织中SP-B、SP-C、FOXA2、磷酸化FOXA2、硝基化FOXA2的蛋白表达水平； 6.采用RT-PCR检测大鼠胎肺组织中SP-B、SP-C、FOXA2 mRNAs表达水平。[结果] 1.应用腹腔注射STZ建立了妊娠糖尿病大鼠模型； 2. GDM组孕鼠及胎鼠血糖及血清胰岛素均偏高，而胎鼠数目明显少于对照组； 3.GDM组胎肺组织学提示胎肺发生成熟障碍且胎肺中表面活性蛋白SP-B、SP-C均减少； 4.GDM大鼠胎肺中FOXA2减少，而磷酸化FOXA2、硝基化FOXA2较对照组升高。 [结论] GDM胎鼠肺上皮细胞分化成熟障碍及表面活性物质合成减少，这可能是由于GDM胎鼠体内存在高血糖及高胰岛素，使转录因子FOXA2发生磷酸化或硝基化，转录活性受到抑制，进而使得肺成熟不良。