氧糖剥夺再灌注后小鼠N2a细胞高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ表达变化的研究

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目的:研究氧糖剥夺再灌注后小鼠神经瘤N2a细胞中高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ (MAN Ⅱ)的表达变化。方法:1.将小鼠神经瘤(N2a)细胞氧糖剥夺4小时后再分别在正常培养条件下培养6小时,12小时及24小时,建立氧糖剥夺/再灌注的细胞模型。2.N2a细胞分为正常对照组、OGD4小时组、OGD4小时/R6小时组、OGD4小时/R12小时组、OGD4小时/R24小时组一共5个组。3.MTT法检测各组细胞的活力。4.免疫荧光共聚焦方法观察MAN Ⅱ在细胞内的分布。5. Western blot检测各组细胞MAN Ⅱ蛋白的表达变化。6. QRT-PCR检测各组细胞中MAN Ⅱ基因的表达变化。结果:1.N2a细胞经氧糖剥夺后,MTT值较对照组明显下降(P<0.05),且随着再灌注时间的延长,MTT值的下降更为显著(P<0.01)。2.免疫荧光共聚焦结果表明,MAN Ⅱ位于细胞质内,细胞核周围。3. MANⅡ的蛋白印迹结果表明,与正常组比较,MAN Ⅱ蛋白的表达在OGD4小时组稍有降低,但是差异不具有统计学意义(P>0.05)。而在再灌注6小时、12小时中,MAN Ⅱ的蛋白表达仍然偏低,与正常组相比,差异不具有统计学意义(P>0.05)。但在再灌注24小时,MAN Ⅱ的蛋白表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。4. MAN Ⅱ的QRT-PCR结果表明,氧糖剥夺4小时后,MAN Ⅱ的mRNA表达较对照组稍有下降,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。随着再灌注时间的延长,再灌注6小时、12小时后,MAN Ⅱ的mRNA表达变化不明显,与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。但在再灌注24小时后,MAN Ⅱ的mRNA表达水平明显下降,与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:氧糖剥夺再灌注后小鼠神经瘤N2a细胞中MAN Ⅱ的蛋白基因表达水平降低,提示缺血再灌注损伤导致高尔基体的糖基化功能受损。
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