KRAB型锌指蛋白数量繁多,在生物的生命过程中扮演重要角色。ZNF268是该蛋白家族的一员。尽管从ZNF268被发现并命名至今已有近二十年,然而人们对ZNF268的功能依旧知之甚少,这可能是ZNF268在啮齿类动物如小鼠和大鼠中无同源基因所致。本实验室已经发现ZNF268基因至少能够产生两种结构功能不同的蛋白产物ZNF268a和ZNF268b2。ZNF268b2能通过促进IKKα/β磷酸化,最终促进TNFα诱导的NF-κB信号,影响宫颈癌的发生;ZNF268a则能在病毒感染后通过结合IKKα、促进IKK复合体的组装达到正向调控NF-κB的目的。而且,同时下调ZNF268a和ZNF268b2能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。这些结果表明,ZNF268a在细胞生命过程和抗病毒过程中均发挥重要作用。天然免疫应答是宿主抵御外来病原体感染的第一道防线。当病原体感染细胞时,模式识别受体识别其保守的成分(如DNA),经过一系列信号转导,导致干扰素的产生和NF-κB通路的激活,最终达到抑制病原体复制和清除损伤细胞的目的。除了病毒和微生物的刺激,大量研究表明DNA双链断裂产生的细胞自身DNA能通过c GAS-STING激活较低水平的天然免疫应答和NF-κB信号。NF-κB又能诱导大量细胞因子和趋化因子的表达,在炎症、免疫应答、增殖和细胞生存等生物过程中都发挥重要作用。尽管对病毒或细胞自身DNA激活NF-κB信号调控机制的研究已取得一定进展,但对参与其中的因子和分子机制仍存在很多盲区。本研究旨在揭示ZNF268a在DNA损伤引起的细胞应答过程中的调节功能。为了探究ZNF268a的生物学功能,我们用DNA损伤试剂CPT作为刺激手段诱导细胞发生DNA损伤。通过confocol实验发现,DNA损伤前后ZNF268a在细胞中的定位几乎不发生变化。而且,我们通过western blot实验检测了DNA损伤修复相关蛋白p-ATM和γ-H2AX的表达,然而ZNF268a蛋白的特异性表达缺失几乎不影响这些蛋白的表达。这表明ZNF268a对DNA损伤修复无明显作用。而DNA损伤应答机制会进一步引发细胞周期阻滞、自噬、凋亡等过程。因此,我们通过MTT、克隆形成实验检测细胞增殖可知,ZNF268a蛋白的缺失能够抑制细胞增殖。经流式细胞术和关键蛋白的检测后,结果表明ZNF268a的敲除对细胞周期和自噬均没有显著调控作用,但ZNF268a的敲除能促进CPT、ETO、TNFα/CHX三种方式诱导的细胞凋亡。这些结果表明,ZNF268a在细胞生命过程中扮演着重要角色。更进一步地,为了探究ZNF268a调控内源性DNA片段引起炎症和细胞死亡的功能,我们利用两种sg RNA介导的基因组敲除技术构建了ZNF268a敲除的U2OS细胞系。然后用DNA损伤药物CPT或ETO处理细胞导致促炎症因子TNFα、IL-6、IL-8的表达在m RNA水平上调,但是ZNF268a的敲除会抑制促炎症因子的产生。我们通过荧光素酶报告基因表达质粒检测ETO处理后NF-κB的活性,发现ZNF268a蛋白的缺失抑制了ETO激活的NF-κB信号。这些结果表明,ZNF268a蛋白的特异性表达缺失能够降低ETO诱导引起的NF-κB通路的活性。综上所述,本研究发现ZNF268a的敲除能抑制细胞增殖,而促进内源性DNA片段诱导的细胞凋亡,同时,能够一定程度上抑制DNA损伤激活的NF-κB通路活性。这些结果不仅丰富了人们对ZNF268a蛋白的认知,而且提示我们内源性与外源性刺激引起的炎症应答可能存在交叉,有助于我们进一步理解内源性与外源性应答的异同。