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目的:前期研究发现miR-125a-5p靶向抑制去甲基化酶TET2的表达,且TET2可抑制HepG2细胞apo(a)的表达,而生物信息学分析表明,MEG3可与miR-125a-5p互补性结合,故MEG3存在抑制miR-125a-5p的可能性,推测MEG3可通过抑制miR-125a-5p,上调TET2,从而发挥抑制HepG2细胞apo(a)表达的作用。拟在高表达apo(a)的HepG2细胞上,检测MEG3的表达水平,并分析转染MEG3后apo(a)的表达情况,并从MEG3/miR-125a-5p/TET2途径研究MEG3调控apo(a)的分子机制。方法:本研究首先用生物信息学在线软件Targetscan分析与TET2mRNA3’-UTR靶向结合的miRs,以其结合的保守性强弱和自由能值大小进行筛选,得到候选miR,再以荧光素酶报告基因系统分析和和验证其结合的靶向性;再用荧光素报告酶系统分析MEG3与miR-125a-5p的靶向性结合。MTT法检测细胞活性,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测高表达apo(a)的HepG2细胞和低表达apo(a)的SMMC7721细胞中MEG3的表达情况;向HepG2细胞转染MEG3,western blot和qRT-PCR检测apo(a)、TET2表达情况;采用小干扰RNA技术沉默TET2的表达。所有数据的统计学分析采用均数±标准差(x±SD)表示,用Graphpad Prism5.0.1对数据进行分析和作图,选取95%可信区间,P<0.05为差异有显著性意义。结果:(1)人TET2 mRNA的3’-UTR有3个强保守性地hsa-miR-125a-5p的结合位点,在线软件BiBiserv2 RNAhybrid可见TET2 mRNA 3’-UTR与hsa-miR-125a-5p结合的自由能均低于阈值(-10 kcal/mol),为-25.5 kcal/mol,说明TET2 mRNA 3’-UTR与hsa-miR-125a-5p有稳定的结合。(2)荧光素酶报告基因系统分析结果表明:转染hsa-miR-125a-5p能使野生型psiCHECK?-2-TET2-WT3’UTR质粒的表达水平显著下降,而对突变型psiCHECK?-2-TET2-Mut 3’UTR质粒的表达无影响,这就提示TET2为hsa-miR-125a-5p的靶标基因,hsa-miR-125a-5p通过靶向结合TET2mRNA 3’-UT抑制野生型重组质粒的表达。(3)生物信息学分析结果表明MEG3与hsa-miR-125a-5能互补性结合,荧光素酶报告基因系统分析结果证实了MEG3与hsa-miR-125a-5p结合的存在。(4)miR芯片结果表明,在HepG2细胞中,hsa-miR-125a-5p表达水平升高,是对照组的近1.5倍,qRT-PCR分析结果表明,高表达apo(a)的HepG2细胞和低表达apo(a)的SMMC7721细胞中MEG3均有表达,但前者MEG3的表达水平显著低于后者。(5)MTT分析结果表明MEG3转染72h才对HepG2细胞产生毒性效用,MEG3转染抑制apo(a)表达。(6)机制研究发现MEG3转染显著下调miR-125a-5p的表达,显著上调TET2的表达和活性;加入miR-125a-5p的mimics可逆转MEG3对apo(a)的下调作用,并抑制TET2的表达和活性,但可被miR-125a-5p的抑制剂逆转;TET2沉默可逆转MEG3对apo(a)的下调作用。结论:MEG3通过miR-125a-5p/TET2途径下调HepG2细胞apo(a)的表达。