酸枣仁中黄酮类化学成分及质量分析方法研究

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中药酸枣仁(Semen Ziziphi Spinosae)是鼠李科(Rhamnaceae)植物酸枣(Ziziphous jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu.et H.f. Chou)的干燥成熟种仁临床多用于治疗失眠和焦虑症。已报道的酸枣仁化学成分主要包括黄酮、皂苷、脂肪油、有机酸等。而现代药理学研究表明,黄酮类化合物是其主要的活性成分,具有镇静催眠的作用。所以,酸枣仁中黄酮类化合物的快速分离鉴定,以及多成分的定量分析,对药材的质量控制和保证临床用药的安全有效具有重要意义。从酸枣仁药材中分离得到5个黄酮类化合物,依据其UV、NMR、HRMS及MSn数据确定了化合物结构,分别为斯皮诺素(spinosin),6’’’-阿魏酰斯皮诺素(6’’’-feruloylspinosin),6’’’-对羟基苯甲酸斯皮诺素(6’’’-p-hydroxybenzoylspinosin),6’’’-对香豆酰斯皮诺素(6’’’-p-coumaroylspinosin)和异牡荆素(isovitexin)。本实验结果为进一步分离鉴定酸枣仁中的黄酮类化合物提供了基础和依据。本论文建立了新的高效液相色谱-光电二极管矩阵检测器/傅立叶变换离子回旋共振质谱/多级质谱技术方法(HPLC-PDA/FTICRMS/MSn)对酸枣仁提取物中的黄酮类化合物进行分离和鉴定。色谱条件为:HYPERSIL C18 (4.6*250 mm,5 pm)色谱柱,柱温25℃,流动相为乙腈-0.1%乙酸水溶液梯度洗脱,检测波长270 nm,进样量20μL,流速0.8 mL/min,分流比为7:3;质谱条件为:ESI离子源正离子检测模式,喷雾电压3.5 kV,毛细管温度275℃,毛细管电压45 V,鞘气流速35 arb,辅助气流速10 arb,扫尾气流速3 arb,Tube Lens 94.5 V,扫描范围为90-1000 Da。最终获得19个黄酮类化合物的紫外光谱数据,精确分子量和多级质谱数据,基于对对照品的多级质谱数据分析,裂解规律的推测,以及文献数据对照,鉴定了10个黄酮类化合物的结构,其余9个化合物则暂定为黄酮类化合物。本文建立的方法有助于研究酸枣仁或其他中药体系中的黄酮类化合物,尤其是含量较低的成分,对于明确酸枣仁药材的活性成分和增强药材的质量控制具有重要意义。中草药以多成分作为物质基础发挥药效作用,多成分的快速、准确、灵敏的分析检测技术和方法是中草药成分分析和质量评价的有力手段。本论文建立了快速、简便的UHPLC (Ultra High Performance Liquid Chromatography)方法用于酸枣仁提取物中黄酮类化合物的指纹图分析,并同时测定了isovitexin、spinosin、swertisin、6’’’-p-hydroxybenzoylspinosin、6’"-p-coumaroylspinosin和6’’’-feruloylspinosin的含量。色谱条件为:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD (2.1*100 mm,1.8μm)色谱柱与Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD (2.1*50 mm,1.8μm)色谱柱串联,柱温为40℃,流动相为乙腈-20 mM磷酸二氢钠水溶液梯度洗脱,流速0.4 mL/min,检测波长270 nm,进样量1μL。Isovitexin的线性范围为0.39-195.00μg/mL,spinosin的线性范围为0.38-191.00 gg/mL,swertisin的线性范围为0.40-201.00μg/mL,6’’’-p-hydroxybenzoylspinosin的线性范围为0.33-166.00μg/mL,6’’’-p-coumaroylspinosin的线性范围为0.39-198.00 gg/mL,6’’’-feruloylspinosin的线性范围为0.39-196.00μg/mL。六种黄酮类化合物的日内及日间精密度的RSD分别小于1.9%和4.0%;重复性的RSD小于4.1%;日内及日间稳定性的RSD分别小于4.7%和4.6%;回收率在97.4%-104%之间,RSD小于4.7%,符合对上述六种黄酮类化合物的定量分析要求。因此,本文所建立的UHPLC方法准确、快速、简便,既可以对大批量的酸枣仁药材进行常规的多成分指纹图谱分析,又可以同时对主要成分进行定量分析,为酸枣仁药材的质量评价提供参考信息。
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