T细胞是后天免疫系统中对抗病原微生物感染,清除自身癌变细胞、维持免疫稳态的一群重要的细胞亚群。T细胞在胸腺中发育成熟,在外周免疫器官中发挥作用,但对于T细胞发育和T细胞抗感染免疫中的调控机制目前仍不清楚。Themis是近年来发现的在T细胞中特异性表达的分子,研究发现Themis在T细胞发育中具有重要的作用,Themis在全基因组水平上的缺失,极大地影响了胸腺T细胞发育。尽管后续对于Themis在T细胞发育中的研究有了很大的进展,还仍有许多问题亟待解决。Themis在胸腺T细胞发育中的分子机制仍需深入研究,Themis在外周T细胞中的功能还一无所知,特别是在抗感染免疫中的作用仍属空白。厘清Themis在T细胞中的功能和分子机制有助于为临床提供新的免疫干预靶点。为了研究Themis在CD4+T细胞抗李斯特菌感染中的作用,我们使用李斯特菌感染对照和外周T细胞中特异性敲除Themis小鼠(Themisfl/fl dlck Cre)。dlck Cre是在胸腺阳性选择后开始表达Cre酶,从而避开Themis在胸腺发育中的影响。7天之后处死小鼠,分析脾脏CD4+T细胞,研究发现,在李斯特菌感染后,Themis的缺失并未影响CD4+T细胞的活化、细胞因子的产生,这提示了 Themis并未影响CD4+T细胞介导的抗李斯特菌感染。此外,为了厘清Themis在胸腺发育和T细胞功能的分子机制,寻找与Themis分子直接结合和相互作用的蛋白,我们有必要构建Themis-3×FLAG过表达的小鼠,然而,在构建此基因型小鼠前,需要首先鉴定Themis-3×FLAG的功能是否和Themis WT的功能一致。本文通过骨髓重构实验验证Themis-3×FLAG的功能,研究发现,与Thcmis-/-小鼠造血干细胞转了空质粒相对比,无论是回补Themis WT还是回补Themis-3×FLAG,均能够恢复Themis缺失造成的胸腺T细胞发育的缺陷,但是回补Themis-3×FLAG后,脾脏、淋巴结中CD4+T和脾脏中CD8+T细胞的比例都低于直接回补Themis WT,这提示3个FLAG标签可能部分影响了 Themis的功能,其功能仍需要进一步实验来验证。