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目的:设计不同的方法分别对牛黄上清片、芩连片和双黄连片进行提取,考察所得到的提取物对六种不同标准菌株的药物敏感性,筛选出合适的实验药物和敏感菌株。采用微孔浊度法研究得出牛黄上清片的适用剂量范围,建立量效标准曲线,并且根据量效标准曲线测定牛黄上清片的效价、不同厂家和不同剂型牛黄上清的效价,从而制定牛黄上清片的质量标准草案。
方法:采用正交实验设计得到三种药物的不同提取物,通过菌敏实验考察三种药物不同提取物对六种标准菌株(大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853、枯草芽胞杆菌 CMCC(B)63501、短小芽孢杆菌 CMCC(B)63202、白色念珠菌 CMCC(F)98001)的敏感程度。根据不同药物提取物的抑菌结果,选出三种药物中最适合应用生物检定法控制质量的一个和敏感菌株。参照并运用中国药典(2010版)二部抗生素效价测定的方法和血清药理学,建立量效标准曲线,进行稳定性、重复性、回收率等方法学考察。根据量效标准曲线测定牛黄上清片的效价、不同厂家和不同剂型的牛黄上清的效价。
结果:牛黄上清片、芩连片和双黄连片的不同提取物对六种标准菌株均显现出了抑菌效果,但是以牛黄上清片加10倍量的水煎煮1.5h,加50%乙醇沉淀后的提取液对金黄色葡萄球菌的抑杀最为明显,选它为供试品、金黄色葡萄球菌为实验菌株。当黄芩苷和栀子苷以5:2混合后,浓度在0.016~0.080g/mL范围内时,两种成分混合的浓度对数剂量和效应呈线性关系,且相关性良好(r=0.9893);根据混合物的量效曲线测定三个不同厂家的牛黄上清片的效价按从大到小顺序分别:丙厂lgR=1448.28U/g、甲厂lgR=1431.03U/g、乙厂lgR=1396.55U/g;牛黄上清片不同剂型的效价按从大到小顺序分别:丸剂lgR=1633.33U/g、胶囊剂lgR=1416.67U/g、片剂lgR=1383.33U/g。
结论:微孔浊度法建立的牛黄上清片质量标准,结果可靠。在线性范围内,采用一剂量法,以中成药中所含主要成分的适当配比制成的混合物做为对照品,对此中成药进行生物检定,方法可行。