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猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2, PCV2)感染是近些年新发现的猪的传染病,主要包括断奶猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)、怀孕母猪繁殖障碍(reproductive failure/sow abortion and mortality syndrome, SAMS)、断奶猪和育肥猪的呼吸道疾病(porcine respiratory disease syndrome, PRDS)、猪皮炎和肾炎综合征(porcine dermatitis and nephropathy syndrome, PDNS)、幼龄仔猪A2型先天性震颤(congenital tremor type A2, CT)、间质性肺炎(intersticial pneumonia, IP)、增生性坏死性肺炎(proliferative and necrotizing pneumonia, PNP)等。PCV2感染能降低猪体免疫力,常引起其他病原微生物的继发或并发感染,加重病情。该病在世界许多国家和地区的广泛流行,已经造成了巨大的经济损失,严重影响着世界养猪业的发展。我国自从2000年郎洪武首次报道检测出PCV抗原以来,北京、浙江、四川、黑龙江等省也报道了有PCV2的感染,并分离到各地PCV2流行毒株。在陕西省也可见到很多临床上疑似PCV2感染的病例,但目前仅有一篇关于PCV2感染的血清学调查报道,还未见有关PCV2的病原学和分子生物学方面的报道,因此本研究开展了陕西省PCV2的分离鉴定及其主要结构蛋白的编码基因ORF2的克隆和序列分析等工作。主要内容及结果如下:1.根据GenBank中已发表的猪圆环病毒(PCV1和PCV2)基因序列,设计并合成2对特异性引物,对8个规模化猪场内124头猪的病料进行了PCV2检测,检测到了78份PCV2阳性病料,受检猪组织样品中PCV2 PCR检测的阳性率为62.9%。结合临床发病情况、PCR检测结果及病理观察,证实了陕西规模化猪场普遍存在PCV2感染。2.将PCR检测为PCV2阳性的组织样品处理后接种到无PCV污染的PK-15细胞中传代,盲传6代后间接免疫荧光鉴定,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光。同时进行PCR鉴定,扩增出了预期长度的PCV2的DNA片段。由此证明,分离出的病毒是PCV2型。通过上述方法,本试验在陕西省共分离到5株PCV2。3.根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)的基因序列,设计1对PCV2的ORF2特异性引物,将本实验室分离的5株PCV2 ORF2基因克隆入pMD18-T载体,筛选出阳性重组质粒pMD-T-ORF2进行测序,并将测序结果与国内外已发表的参考毒株进行序列比对分析。结果表明,分离到的5株PCV2的ORF2基因大小相同,都为702 bp,编码一条233个氨基酸组成的多肽;其核苷酸与参考毒株的同源性为90.5%～99.7%,氨基酸同源性为81.2%～97.4%;本研究分离的5个分离毒株亲缘关系很近,同源性为98.3%～99.7%;5株陕西分离毒株与国内其他省份的分离株的亲缘关系较近,同源性为95.6%～99.3%,处在同一条大的分支上;5株陕西分离毒株与台湾分离株和加拿大分离株亲缘关系更远,同源性为90.5%～94.2%,处于较远的分支上。本研究成功的从陕西省养猪场分离到5株PCV2,并对所分离的毒株进行分子流行病学研究,从分子水平上揭示了PCV2在陕西省的流行、变异规律以及主要结构基因的分子特征,为PCV2分子流行病学的研究提供理论依据,也为陕西省PCV2的诊断及预防提供了新的物资材料和理论资料。