如今,结核病（TB）和艾滋病（HIV）是世界范围内引起人类死亡的重要原因。结核病主要由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起。由于结核分枝杆菌致病性强以及生长速度慢,而耻垢分枝杆菌（M.smegmatis）生长速度快且为非致病菌,因此M.smegmati 作为结核分枝杆菌的模式菌株被广泛用于对分枝杆菌的研究。RpfA是具有肽聚糖水解酶活性的复苏促进因子。复苏促进因子与菌体从休眠到复苏状态的转变有关,同时还可以促进活细胞的生长。据报道,结核分枝杆菌中的rpfA的转录受到cAMP受体蛋白CRP（Rv3676）的激活,而天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）中的rpfA还同时受到CRP与ydaO核糖开关的调控。本课题首先通过5’-RACE实验确定了M.smegmati 中rpfA（MSG₅700）基因的转录起始位点,通过RT-PCR实验验证了rpf 基因与其上游基因moaD2部分共转录。然后通过基因组上的定点突变,启动子活性测定实验以及凝胶迁移实验确定了rpfA启动子上游的CRP（MSMEG₆189）结合位点。通过启动子活性测定,荧光定量PCR等实验,证实了 CRP可以激活rpfA启动子转录以及rpfA与上游moaD2基因的共转录。通过序列分析预测到rpfA的5’-UTR存在ydaO核糖开关,我们还在M.smegmatis以及大肠杆菌中通过启动子活性测定实验证实此区域受到c-di-AMP的调控,当c-di-AMP浓度低时,下游基因的表达量升高。此外,我们还发现rpfA的转录受到CarD蛋白的激活,在CarD蛋白的过表达株中,rpfA的表达是上调的,并且这种激活作用不依赖于CRP。通过凝胶迁移实验确定了 CarD通过结合于rpfA启动子来激活rpfA的转录。总之,本课题证实了M.smegmatis中rpfA所受到的复杂的调控机制,为研究CRP的远距离调控机制奠定了基础,为寻找新的药物靶标提供了可能。