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目的探究RIP 1介导的自噬流在2型糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用。方法在体实验采用4周龄SD雄性大鼠制备2型糖尿病大鼠心肌纤维化模型。实验随机分为2组:对照组(CON组)、糖尿病组(DM组),n=20。DM组持续喂食高脂高糖饲料,并于第8周龄腹腔注射剂量为50 mg/kg的链脲佐菌素(STZ)溶液。两组于第24周龄末,麻醉大鼠并提取心脏。采用ELISA检测胶原蛋白I和III的含量;采用免疫组化测定心肌纤维化程度;采用Western blot法及免疫组化检测RIP 1、P62、LC3 II/I及Cathepsin D的蛋白表达。离体实验通过培养原代心肌成纤维细胞,采用正常糖(5.5 mM)或高糖(25 mM)培养不同时间并根据RIP 1在高糖下的表达高峰(即48 h)给予慢病毒转染沉默RIP 1基因。实验随机分为6组:正常糖组(NG组)、正常糖阴性病毒组(NG+scr shRNA组)、正常糖RIP 1沉默组(NG+shRNA RIP 1组)、高糖组(HG组)、高糖阴性病毒组(HG+scr shRNA组)、高糖RIP 1沉默组(HG+shRNA RIP 1组)。采用ELISA检测胶原蛋白I和III蛋白表达;Western blot法检测RIP 1、P62、LC3 II/I及Cathepsin D蛋白表达;双荧光mRFP-GFP-LC3质粒转染及Acridine orange(AO)荧光染色法检测细胞自噬流中自噬小体和溶酶体的变化。结果在体实验中,与CON组相比较,DM组的空腹血糖增高,血清胰岛素含量变化无统计学意义(P>0.05),但敏感性降低(P<0.05);心/体质量比增加(P<0.05);HE染色提示心肌肥厚(P<0.05),Masson染色提示胶原纤维增生(P<0.05);RIP 1、P62、LC3 II/I及Cathepsin D蛋白表达上调(P<0.05)。在离体实验中,与NG组比较,HG组胶原蛋白I和III表达上调(P<0.05);RIP1、P62、LC3 II/I及Cathepsin D蛋白表达上调(P<0.05);mRFP-GFP-LC3质粒转染及AO染色分别提示自噬流中自噬小体大量蓄积和溶酶体完整性被破坏。与HG组比较,HG+shRNA RIP 1组的胶原蛋白I和III以及RIP 1、P62、LC3 II/I及Cathepsin D蛋白表达下调(P<0.05);自噬流的受损程度减轻。结论RIP 1上调可引起2型糖尿病大鼠心肌纤维化,其作用机制可能与损伤心肌成纤维细胞自噬流有关。