HGF基因转染对髓核细胞生物学活性及细胞外基质表达的调节作用

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背景:退变性椎间盘病是导致各种脊柱退行性疾患的主要原因。椎间盘退行性变是椎间盘突出的前提和病理基础。椎间盘退变时其细胞减少且功能退化,髓核脱水,合成蛋白多糖能力减弱,胶原的排列和类型均发生改变,正常功能受到严重损害。椎间盘组织再生能力有限,一旦发生退变,很难阻止或逆转。研究显示椎间盘细胞营养供应降低和椎间盘退变关系密切,因此诸多影响椎间盘血供的因素亦可导致椎间盘退变。椎间盘组织内髓核细胞的主要功能是分泌胶原和蛋白聚糖(Proteoglycan,PG),其功能降低、细胞外基质减少、微环境异常可导致椎间盘生物学功能减弱,研究证实椎间盘退变与来源于椎间盘细胞的基质合成物减少有关。目的:观察携带有GFP-HGFcDNA质粒转染人髓核细胞后对髓核细胞增殖活性及细胞外基质表达的调节作用。方法:收集人退变髓核组织标本,分离培养髓核细胞,构建HGF基因质粒,采用RocheFuGENEHD转染试剂,按照6:2、7:2、8:2比例,利用激光共聚焦显微镜观察并筛选HGF质粒转染最佳比例;选取HGF质粒最佳作用浓度,设立对照组、空白质粒组、HGF因子组、HGF基因转染组,作用于髓核细胞后,采用RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖及SOX9mRNA的表达,流式细胞仪检测髓核细胞增殖周期。结果:HGF基因转染髓核细胞后,激光共聚焦显微镜观察,在7:2时达到最佳转染效果,瞬时转染效率为对31.4%。HGF因子刺激组和HGF基因转染组均可促使髓核细胞增殖以及细胞外基质的表达,较对照组和空白质粒组有显著差异(P<0.05);HGF基因转染组较HGF因子刺激组促进髓核细胞增殖的作用更为明显。结论:HGF基因转染后可促进髓核细胞增殖,上调细胞外基质表达。
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