【摘 要】
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本论文从海南、湛江等海域采集海绵样品,进行海绵共生放线菌的分离,对所分离的放线菌进行抗MRSA活性菌株的筛选,并对活性较强的菌株HA01041、HA01184进行分类鉴定、发酵优化等方面的研究,主要研究结果如下:采用7种培养基对采集自湛江特呈岛的海绵样品进行放线菌分离。结果表明,以海水高氏一号培养基为分离培养基时,能够获得数量、种类最多的放线菌,且细菌、真菌数量少,最适于海绵共生放线菌的分离。以海
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本论文从海南、湛江等海域采集海绵样品,进行海绵共生放线菌的分离,对所分离的放线菌进行抗MRSA活性菌株的筛选,并对活性较强的菌株HA01041、HA01184进行分类鉴定、发酵优化等方面的研究,主要研究结果如下:采用7种培养基对采集自湛江特呈岛的海绵样品进行放线菌分离。结果表明,以海水高氏一号培养基为分离培养基时,能够获得数量、种类最多的放线菌,且细菌、真菌数量少,最适于海绵共生放线菌的分离。以海水高氏一号为分离培养基,采用平板稀释法,从海南、湛江沿海采集的39份样品中共分离获得放线菌583株。以MRSA3558菌株为指示菌,通过纸片扩散法筛选得到77株活性菌。其中菌株HA01041、HA01184活性较强且遗传稳定,选择这两个菌株作为目标菌株进行下一步研究。结合菌株HA01041、HA01184的形态特征、培养特征、生理生化特征、16S rDNA及其系统发育分析,初步鉴定菌株HA01041为春季链霉菌Streptomyces verne;菌株HA01184属于链霉菌属,可能是来自海洋的一个新种,命名为Streptomyces sp. HA01184,有待于DNA-DNA杂交进一步鉴定。研究明确了菌株HA01041、HA01184的最佳发酵条件和培养基组成。确定菌株HA01041最佳培养基组成及发酵条件为:蔗糖1.0%,甘油2.0%,硫酸铵1.0%,大豆玉米粉1.5%,K2HPO4 0.05%,天然陈海水75%,蒸馏水25%,初始pH7.0~7.2,种龄48h,接种量10%,摇床转速为200r/min,培养温度28℃,250mL三角瓶装液量75mL,发酵培养5d。确定菌株HA01184最佳培养基组成及发酵条件为:可溶性淀粉1.5%,葡萄糖1.5%,硫酸铵1.0%,大豆玉米粉1.5%,K2HPO4 0.05%,天然陈海水75%,蒸馏水25%,初始pH7.0~7.2,种龄60h,接种量12%,摇床转速为200r/min,培养温度28℃,250mL三角瓶装液量75mL,发酵培养5d。通过发酵优化,菌株HA01041、HA01184的抑菌圈直径分别由16.0mm、18.0mm增大为26.0mm、27.5mm。对菌株HA01041、HA01184所产抗菌活性物质理化性质进行了初步探讨,研究表明菌株HA01041、HA01184所产的抗菌活性物质均具有较强的光稳定性和热稳定性,当发酵液pH3.0~9.0时,抑菌活性变化不大。菌株HA01041、HA01184所产的活性物质均易溶于氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、乙醇及丙酮,微溶于水,不溶于苯、石油醚和环己烷。
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