产淀粉酶菌株的筛选与发酵条件的优化及其降解淀粉途径的探讨

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本文从淀粉厂土壤中筛选到了一株高产淀粉酶菌株,并对其发酵条件加以优化。为了探讨该菌株调控淀粉酶合成的关键基因及其降解淀粉的代谢途径,运用基因组学和转录组学技术测定了该菌株的基因组序列和淀粉驯化前、后转录组基因的表达差异,对所测得的结果进行生物信息学分析,具体研究成果如下:1.从采自大连中佳淀粉厂的土壤中,分离出10株产淀粉酶菌株,利用淀粉鉴别培养基和二硝基水杨酸(DNS)法,进行菌株产淀粉酶活力的测定,筛选得到一株高产淀粉酶菌株LN-8。经鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。2.采用单因素试验与Box-Behnken响应面法,对菌株LN-8的发酵条件加以优化。结果显示,菌株LN-8的最佳发酵条件为:淀粉1%、黄豆饼粉1%、氯化钠1%、p H8.0、温度30℃、发酵时间6 d、接种量2%。在此最佳条件组合下,菌株LN-8产淀粉酶的活力为141.55±0.43 U/m L。3.采用Illumina平台测定菌株LN-8基因组序列,并进行生物信息学分析。结果显示,菌株LN-8基因组大小为4,164,651 bp,GC含量为43.63%,包含4226个蛋白编码基因(CDSs)。COG结果显示,菌株LN-8基因组中有8.49%的基因具有糖类转运与代谢功能。KEGG结果显示,该菌株调控淀粉与蔗糖代谢的基因为48个。CAZy结果显示,该菌株编码淀粉酶GH13家族的基因数为8个。表明菌株LN-8具有良好的淀粉降解力。4.采用Illumina平台测定菌株LN-8经淀粉驯化前、后的差异基因表达情况,并进行生物信息学分析。结果显示,菌株LN-8驯化前后差异显著的基因为1853个。GO结果显示,菌株LN-8在生物过程中富集到的差异显著基因为802个,其中,碳水化合物代谢过程中的差异显著基因为65个。KEGG结果显示,与淀粉降解有关的差异显著基因,主要富集于淀粉与蔗糖代谢之中,其中,编码麦芽糖淀粉酶基因mdx D与驯化前相比上调了3.40倍、低聚-1,6-葡糖苷酶基因mal L与驯化前相比上调了2.95倍,麦芽糖磷酸化酶基因yvd K与驯化前相比上调了3.58倍。由此推测,菌株LN-8降解淀粉主要是通过麦芽糖淀粉酶作用,水解生成糊精和麦芽糖,其中,糊精在低聚-1,6-葡糖苷酶的作用影响下形成葡萄糖,麦芽糖则在麦芽糖磷酸化酶调节下生成葡萄糖。
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