目的应用细菌内同源重组法构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase，CD)基因的重组腺病毒载体pAd-CD。方法TRIzol法提取E.coliJM109总RNA。经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的基因CD，并与高效克隆载体pMD18-T连接，转化进E.coliJM109感受态细菌中，TA克隆扩增含有CD全长cDNA的片段，亚克隆至pAdTrack—CMV穿梭质粒，得到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-CD，经测序无误后并PmeⅠ酶切线性化，再转化进含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态E.coli BJ5183中，进行同源重组产生腺病毒质粒。经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的pAd-CD重组质粒，并进一步测序。结果构建了腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-CD，并进一步应用细菌内同源重组成功构建了含CD基因的重组腺病毒载体pAd-CD，以pAd-CMV-CD为模板PCR及双酶切均可得到1293bp的目的片断；PacⅠ酶切pAd-CD可获得一31kb的大片段和一3.0kb的特征性条带，测序结果与目的基因序列相符。结论应用细菌内同源重组法可构建含CD基因的重组腺病毒载体，为今后进一步研究CD／5-FC自杀基因系统的抗肿瘤机制及在胰腺癌基因治疗中的应用创造条件。