胆红素脑病仔鼠脑组织S-100、NSE的mRNA和其蛋白水平变化研究

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目的:研究新生7日龄仔鼠脑组织S-100蛋白(S-100protein,S-100)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)、髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)对胆红素脑病的诊断价值及其变化机制。 方法:选用新生7日龄清洁级Wistar大鼠120只,随机分为对照组及实验组,每组再按六个时间点(6h、12h、24h、48h、72h、96h)分为6组,各组均为10只仔鼠。对照组仔鼠给予腹腔注射生理盐水0.5ml,实验组仔鼠给予腹腔注射胆红素200mg/kg制成胆红素脑病模型。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术动态观察胆红素脑病仔鼠不同时间点脑组织S-100、NSE的mRNA表达的变化;应用免疫组织化学方法动态观察不同时间点脑组织S-100、NSE、MBP蛋白表达的变化,探讨哪种神经生化标志物更能准确反映胆红素脑病仔鼠脑组织损伤的程度。 结果:1.实验组脑组织S-100mRNA表达6h开始升高,但与对照组比较无显著性差异,12h明显升高,48h达峰值,72h下降,至96h与对照组比较无显著性差异,但仍高于对照组;2.实验组脑组织NSEmRNA表达6h开始明显下降,而实验组各组之间及对照组各组之间差异无显著性;3.造模后6h海马区脑组织S-100阳性表达升高,但与对照组比较无显著性差异,12h明显升高,48h达峰值,72h下降,至96h与对照组比较无显著性差异,但仍明显高于对照组。而皮质区脑组织S-100阳性表达6h明显升高,48h达峰值,72h下降,至96h与对照组比较无显著性差异,但仍高于对照组;4.造模后6h丘脑区脑组织S-100阳性表达明显升高,72h下降,至96h与对照组比较无显著性差异,但仍高于对照组,实验组48hS-100阳性表达明显高于所有实验组。而苍白球区脑组织S-100阳性表达6h明显升高,48h达峰值,72h下降,至96h与对照组比较仍有显著性差异;5.造模后6h海马区脑组织NSE阳性表达下降,但实验组各组与其各自对照组比较无显著性差异,而皮质区脑组织NSE阳性表达6h~96h均明显下降,与对照组比较均有显著性差异;6.造模后6h丘脑区脑组织NSE阳性表达下降,但与其对照组比较无显著性差异,实验组24h、72h与其对照组比较差异有显著性;苍白球区脑组织NSE阳性表达6h~96h明显下降,与对照组比较均有显著性差异;7.实验组海马区脑组织MBP阳性表达6h显著降低,之后开始升高,至72h与对照组比较无显著性差异;皮质区6h开始降低,但与对照组比较无显著性差异,至96h与对照组有显著性差异。8.与对照组比较,丘脑、苍白球区脑组织MBP阳性表达均低于对照组,二者与对照组比较差异均无显著性。各自对照组各组之间及实验组各组之间比较无显著性差异。 结论:1.脑组织S-100mRNA在胆红素脑病后12小时明显升高,48小时达峰值,继而下降;NSEmRNA在胆红素脑病后6小时开始下降,持续至96小时;2.脑组织海马、皮质、丘脑、苍白球区S-100蛋白在胆红素脑病后6小时开始升高,48小时达峰值,继而下降;NSE蛋白在胆红素脑病后6小时开始下降,持续至96小时;3.S-100、NSEmRNA的变化同S-100、NSE蛋白的变化趋势一致;4.脑组织S-100、NSE可反映神经胶质细胞、神经元的损伤程度,是判定胆红素脑病的可靠神经生化指标。
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