【摘 要】
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真核细胞中,主要负责编码蛋白质基因转录的是RNA聚合酶Ⅱ,即RNA Pol Ⅱ[1]。转录延伸在早期并没有受到足够的重视,但随着研究的不断深入,特别是正性转录延伸因子——P-TEFb（Positive Transcription Elongation Factor B）的发现,使人们认识到转录延伸也具有高效有序,精密细微的调控机制。随着对P-TEFb研究是深入,陆续发现了和P-TEFb结合的一些蛋
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真核细胞中,主要负责编码蛋白质基因转录的是RNA聚合酶Ⅱ,即RNA Pol Ⅱ[1]。转录延伸在早期并没有受到足够的重视,但随着研究的不断深入,特别是正性转录延伸因子——P-TEFb（Positive Transcription Elongation Factor B）的发现,使人们认识到转录延伸也具有高效有序,精密细微的调控机制。随着对P-TEFb研究是深入,陆续发现了和P-TEFb结合的一些蛋白,并使P-TEFb处于有活性和非活性两种形式:7SK snRNP复合体使P-TEFb处于非活化的形式;P-TEFb与Brd4结合时,处于活性形式;超级延伸复合体SEC（Super Elongation Complex）是P-TEFb的另一个活性形式。P-TEFb对转录的促进主要是通过磷酸化RNA聚合酶Ⅱ大亚基的CDT第二位丝氨酸来解除转录延伸的阻滞,促进转录的顺利进行,保证全长转录产物的合成。P-TEFb是HIV-1转录所必需的因子,HIV-1的Tat介导的反式激活需要SEC的参与。EAF1（ELL-associated Factor 1）是 2001 年才被发现的一个和 ELL 及 ELL2相结合的蛋白。并发现在EAF1的C端有转录激活结构域。EAF1可以促进基因的体外转录,也可以促进ELL1或ELL2的转录。我们想探索EAF1对HIV-1的转录究竟是如何影响的。本课题中,我们通过Crispr-Cas9技术,在F1C2细胞中构建了稳定敲除EAF1的细胞株。F1C2是以HeLa细胞为基础,稳定表达CDK9-Flag的细胞株。利用HIV-1的启动子偶联萤火虫荧光素酶这一模型研究EAF1对HIV-1的转录的影响,结果显示,EAF1对HIV-1启动子的Tat蛋白依赖的转录起到抑制作用。并发现EAF1对所检测内源性蛋白的表达无明显影响。其机制是EAF1和AFF1/4竞争性结合ELL2,所以EAF1抑制HIV-LTR的Tat依赖性转录。同时,实验证明,EAF1并不是SEC的组分之一,而是在竞争过程中和SEC相联系。
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