【摘 要】
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目的探究不同浓度PTEN-Long蛋白对非小细胞肺癌细胞（A549）、人肺癌细胞（H1299）的影响。方法利用GenBank数据库,获取PTEN-Long DNA序列并设计引物。以HEK293T细胞提取的RNA为模版,扩增PTEN-Long基因。构建pc DNA3.1-PTEN-L真核重组质粒后转染293T细胞,待PTEN-Long蛋白表达后,裂解细胞纯化得到PTEN-Long蛋白。利用流式细胞技
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目的探究不同浓度PTEN-Long蛋白对非小细胞肺癌细胞（A549）、人肺癌细胞（H1299）的影响。方法利用GenBank数据库,获取PTEN-Long DNA序列并设计引物。以HEK293T细胞提取的RNA为模版,扩增PTEN-Long基因。构建pc DNA3.1-PTEN-L真核重组质粒后转染293T细胞,待PTEN-Long蛋白表达后,裂解细胞纯化得到PTEN-Long蛋白。利用流式细胞技术、TUNEL染色法检测不同浓度PTEN-Long蛋白（10、50、100 n M）对非小细胞肺癌细胞（A549）、人肺癌细胞（H1299）的凋亡差异。通过Western blot法检测不同浓度PTEN-Long蛋白对PI3K/AKT信号通路中相关分子表达水平的影响。结果1.本实验中构建的pcDNA3.1-PTEN-L真核重组质粒转染HEK293T细胞后,PTEN-Long蛋白成功表达。用亲和层析方法纯化后得到纯度合格的PTEN-Long蛋白。2.流式细胞技术、TUNEL染色法显示在A549、H1299两种细胞系中不同浓度PTEN-Long蛋白处理组均可促进的非小细胞肺癌细胞凋亡（P<0.05）,且浓度越高细胞凋亡比例越高。3.Western blot法检测显示PTEN-Long蛋白可使非小细胞肺癌细胞p-PI3K/PI3K比值和pAKT/AKT比值显著降低（p<0.01）。结论PTEN-Long蛋白在体外水平可通过PI3K/AKT信号通路促进非小细胞肺癌细胞凋亡,且呈剂量依赖性。
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