大肠癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一。现已明确包括癌基因、抑癌基因、错配修复基因、细胞周期调控相关因子突变等的一系列积累，形成了恶性肿瘤发生发展的基础，但仍不能完全解释大肠从正常上皮到癌转移的整个过程中的所有分子变化，且缺乏适合于大肠癌特异性诊断和治疗的目的基因。因此，大肠癌相关新基因的识别、克隆及其结构和功能的研究，对于阐明大肠癌的发生发展机理及大肠癌的防治具有重要意义。 为在分子水平寻找与人大肠癌发生发展相关的新因素，郑树等应用减式探针在正常人肠粘膜组织cDNA文库中，筛选到在正常人肠粘膜组织和肠癌组织中差异表达的新基因SNC6（Genbank登录号HSU17714），并对新基因的结构及功能在核酸水平作了一系列的研究，1998年被国际命名委员会命名为ST13（Suppression of Tumorigenicity 13）基因。ST13基因cDNA全长3145bp，ORF编码一个由369个氨基酸组成的蛋白质；该基因定位于染色体22q13区带，共有12个外显子及11个内含子；ST13 mRNA在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一，在大肠癌组织中的表达低于大肠正常粘膜。ST13基因在大肠癌低表达可能与其上游表达调控的改变有关。转基因体外研究表明ST13基因过表达有抑制大肠癌细胞系生长的作用；荷瘤裸鼠体内实验观察到ST13基因有抑瘤作用，并使肿瘤转移能力下降。在NCBI最近公布的22号染色体的人类基因图谱中收录了ST13基因。上述研究结果显示ST13基因有望作为新的大肠癌负相关基因加以研究和利用。 基因的功能最终表现在其所编码的蛋白质。mRNA水平的研究能提供一些有关基因表达水平和组织分布等信息，但许多实验表明mRNA表达与蛋白质表达并非完全一致，蛋白质表达还存在翻译后加工修饰、降解、转运、定位以及蛋白质之间的相互作用等复杂现象。人类基因组计划的初步完成也意味着后基因组时代L 己经来临，以了解蛋白质在体内的活动规律和功能为基础的功能基因组研究正成DD 为主命科学研哭的页姿万同。为此，本买验在核酸水干对sT13 泉凶研五的是础Dl 上，诺一步研究ST13某因表达的蛋白质本身的特。吐，以期最终在蛋白质水平阐ll 明ST13 ＄因的结构乃功能。l11．ST3某因的原核表达及蛋白纯化：将ST13。DNAORF经PCR扩增，重组 l构建 ST13 cDNA／pGEX－4T－2凉核表达质粒。阳性豆隆质粒以 BamH限制性酶切 l 和 DNA序列分析筛选。转化E．c。h凿表认GST．ST13融合蛋白。蛋白表达以 lISDSPAGE及Westernblot证实。GST－ST13融合蛋白主要存在于诱导表达菌的可 ll 溶性上清，经 Glutathione Sepharose 4B一步亲和层析纯化，表达量占大肠杆菌总 ll 蛋白20％，回收融合蛋白2．smMi，纯度达gi．3％。GST．ST13融合蛋白以凝血酶 lD 切得主u盯13齿日。D12．ST13 蛋白单克隆杭体的制各：以原核表达的 GST．ST13 融合蛋白免疫 lIBALB／C小鼠，按杂交瘤技术建立了3个持续分泌抗ST13蛋白单抗的细胞株，单ll 抗的 ELISA效价为旷～旷，Western blot证实该单抗在原核、培养细胞及组织水 ll 平均具有高肛的特异性，可用干检测组织表达的ST13 i自。制备ST13 i臼免授lD 莱和屏析杆，纯化诬茧抗。D13．ST3ffi白的生物学特性：以盯 单抗作免没组织化学和Western七＊，检ll 测 ST13蛋白在提取的组织总蛋白及各种组织切片中的表达，研究该蛋白的生化 ll 特征、细胞内定位及组织分布。以盯 单抗作Western七lot表阴，Lg核细胞、RIl 核细胞系及人大肠组织表达的 ST13蛋白的 SDS4？AGE表观分子量均为 50KD，比 lD 其计算分子量约大 10 KD（计算分子量 41二24 KD），但脱糖基化实验表明该齿臼 Dl 在直核细胞中不存在糖某化修饰。以 ST13 单抗作免疫组化表明该蛋白表达于 ll“SW480细胞、大肠猫膜上皮细胞浆，在胞浆中呈均匀分布；结合 ST13蛋白的氨 lD 某酸绸成及模拟立体结构亲水性计算机分析，推测该蛋白为细胞浆可溶性蛋臼分DD 子。在免疫组化己检测的大肠、十二指肠、胃、胰腺、肝、胆管、肺、’厅、乳腺、D121l 卵巢及子宫内膜等正常组织和／或肿瘤组织中，可见到ST13蛋白主要表达于上皮D 组织，均定位于细胞浆：结果还提示S＊13蛋白在各种正常及肿瘤组织中的表达D 程度不同，其中正常胃、大肠上皮组织呈强阳性表达，相应的癌组织呈低表达；l 乳腺、卵巢及子宫内膜癌组织表达高于相应的正常组织；正常肺泡上皮、支气管D 上皮为阴性或弱p［1性，肺低分化?