论文部分内容阅读
本研究以5-硝基糠醛为分子模板合成了硝基呋喃类药物的共有半抗原,分别采用重氮法和戊二醛法合成了两种免疫抗原和两种包被抗原。重氮法合成的免疫原的偶联比为13:1,包被原偶联比为14:1;戊二醛法合成的免疫原的偶联比为20:1,包被原偶联比为16:1。用两种免疫抗原免疫新西兰白兔,所得抗血清经辛酸-硫酸铵法沉淀和DEAE-纤维素阴离子交换层析纯化,得到纯度较高的抗体IgG。以方阵滴定法确定重氮法免疫原所得抗体的效价为1:320 000,戊二醛法免疫原所得抗体的效价为1:640 000。两种抗体均对7种硝基呋喃类药物具有广谱交叉反应性。在优化了不同包被原与不同抗体的组合后,以重氮法合成的包被原和戊二醛法合成的免疫原所得抗体为基础建立了一种检测7种硝基呋喃类药物的广谱特异性间接竞争ELISA方法。该法对呋喃西林、硝呋酚酰肼、硝呋索尔、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃苯烯酸钠的交叉反应率分别为95%、79%、76%、68%、61%、59%、42%,IC50分别为95、79、76、68、61、59、42 ng/mL,最低检测限分别为8.3、14.0、15.8、11.0、11.0、13.5、18.2 ng/mL。在空白全价饲料中分别添加7种硝基呋喃类药物,以ELISA方法检测,添加回收率范围为78.0%-98.4%,变异系数为6.2%-13.8%。同时,建立了一种检测7种硝基呋喃类药物的HPLC方法,7种药物在0.01-1μg/mL范围内有良好的线形关系。该法对全价饲料中呋喃西林、呋喃它酮、呋喃唑酮、硝呋酚酰肼、呋喃苯烯酸钠、呋喃妥因、硝呋索尔的检测限分别为21、26、28、32、17、19、20 ng/g,在空白全价饲料中的添加回收率为70.1-99.6%。本研究建立了一种快速、灵敏的检测饲料中7种硝基呋喃类药物的ELISA方法,并以一种高效液相色谱法给予确证,以期能更加快速有效的监控养殖业中硝基呋喃类药物的非法使用,保障动物饲料及动物性产品安全。