噪声性耳聋（Noise induced hearing loss,NIHL）已经成为我国继尘肺病之后的第二大职业病,严重影响我国劳动者的生命质量,威胁着劳动者的身体健康。尽管NIHL的直接病因已经明确,即长期暴露于高强度的噪声,但NIHL的发病机制尚不完全清楚。目前公认的NIHL可能发病机制之一是噪声暴露诱导了人体前庭器官毛细胞的程序性死亡进而导致了患者听力出现不可逆的损伤。在动物实验中已经证明:当实验动物暴露于噪声环境后,其耳蜗毛细胞内的c-Jun氨基端激酶1（JNK1）被激活。此外,既往的研究证实了JNK1能够参与细胞的增殖、凋亡等一系列过程并起到重要作用。为了减少NIHL对劳动人口的健康损伤,早期发现NIHL的易感人群,本研究通过对JNK1与NIHL的关联进行研究,发现NIHL的新的易感性位点,并探讨噪声性耳聋的发病机制。1.JNK1基因多态性与职业人群中噪声性听力损失易感性关联研究选择来自江苏省内5家企业中暴露于噪声作业环境中的2090名工人参与本次研究。通过现场流行病学调查,职业健康体检和现场职业有害因素检测的方法搜集研究对象及其工作环境的相关资料。根据统一规定的纳入标准和排除标筛选研究对象,对不符合要求的研究对象予以剔除。按照病例对照研究的方法,根据职业健康体检的结果,将纳入的研究对象按照是否出现NIHL分别分配到病例组和对照组。由经过专业培训的调查人员使用调查表对所有研究对象进行现场问卷调查,搜集研究对象的人口学资料信息、职业史、既往史、噪声的防护用品使用情况以及家庭遗传性疾病等情况。由具有职业病诊断资质的工作人员根据中国《职业性噪声聋诊断标准》（GBZ 49-2014）,通过纯音听阈测试,对所有研究对象的听力进行检测。由临床医生对所有研究对象进行体格检查,并搜集所有研究对象的静脉血。根据中国《工作场所中物理因素的测量》（GBZ/T 189.8-2007）中规定的工作场所中环境噪声暴露水平的测量方法,使用个人噪声剂量计检测所有受试者工作环境中的噪声暴露强度。根据美国国家生物技术信息中心（NCBI）（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）数据库和千人基因组计划数据库筛选JNK1基因中的目标单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）位点,最终选择了三个JNK1的SNP位点,包括rs9284、rs8428、和rs11598320。通过搜集到的研究对象的静脉血提取DNA,通过高通量的基于二代测序的Hi-SNP分型技术对所有研究对象的rs9284、rs8428、和rs11598320的基因位点进行分型。对被选中的SNP位点的不同基因型在病例组和对照组中的分布进行比较。根据纳入标准和排除标准严格筛选所有研究对象后,最终1333名工人被纳入本次研究。根据纯音听阈测试的结果分组后,最终病例组纳入683人,对照组纳入650人。根据统计学检验的结果显示,病例组与对照组人群在性别、年龄、噪声暴露工龄、噪声暴露水平、吸烟、饮酒等方面没有统计学差异（P>0.05）。根据遗传平衡检验的结果,对照组中各基因型的分布符合遗传平衡定律（P>0.05）。在多种模型下,rs11598320各基因型在病例组和对照组的分布有显著性差异（P<0.05）,根据等位基因模型的结果,rs11598320的T等位基因与NIHL风险增加相关（P=0.012,OR=1.27,95%CI=1.05-1.53）。分层分析结果显示,在显性模型下,当噪声暴露年≤16年或噪声暴露水平>92d B时,rs11598320各个基因型在病例组和对照组中的分布有显著性差异（P<0.05）。当噪声暴露水平>92d B时,rs8428各个基因型在病例组和对照组中的分布有显著性差异（P<0.05）,TT基因型与NIHL的风险增加相关（OR=1.73,95%CI=1.11-2.70）。单倍型TCT（rs9284-rs8424-rs11598320）与NIHL的风险增加相关（OR=1.30,95%CI=1.00-1.68）。JNK1基因的SNP（rs11598320和rs8424）与中国人群对NIHL的易感性相关。rs11598320的TT基因型与rs8428的TT基因型可能是NIHL的危险因素,有潜力成为NIHL的新的易感性标志物。2.小鼠耳蜗毛细胞中has-mi R-4695-3p对JNK1的调控作用研究mi RNA是由大约22个核苷酸组成的内源性非编码RNA,既往的研究已经证明了mi RNA在人体的多项生理活动中都具有重要功能,在疾病的发生过程也具有重要的地位。mi RNA能够作为多种疾病的生物标志物,同时可以用来揭示多种疾病的发病机制,在预防和治疗疾病的应用中有广阔的前景和巨大的潜力。在本次研究中,通过预测得到以第一部分发现的与NIHL易感性之间存在关联的SNP位点rs11598320为靶点的mi RNA-4695-3p,研究mi R-4695-3p对JNK1的调控作用,揭示mi R-4695-3p对于JNK1的可能调控方式,对NIHL的发病机制进行补充,为NIHL的预防和治疗提供新的靶点。通过构建rs11598320的野生型与突变型载体,使用双荧光素酶报告基因技术检测mi RNA-4695-3p对JNK1的靶向调控作用。再通过细胞实验,使用mi RNA模拟物转染小鼠耳蜗毛细胞,通过实时定量PCR技术检测JNK1的转录水平和mi RNA-4695-3p的相对表达量,使用Western Blot技术检测JNK1蛋白的表达水平。结果显示:mi RNA-4695-3p能够与rs11598320野生型等位基因T结合的更加紧密,在对HEI-OC1转染mi RNA模拟物24h后,mi RNA-4695-3p的相对表达量上调（P<0.001）,JNK1的转录水平下调（P=0.010）,JNK1蛋白表达水平下调（P=0.021）。转染48小时后,mi RNA-4695-3p的相对表达量上调（P=0.030）,但JNK1的转录水平上调（P=0.013）,JNK1蛋白表达水平上调（P=0.005）。总之,mi RNA-4695-3p与rs11598320位点的不同基因型的结合能力不同,可能是导致个体NIHL易感性差异的分子基础。mi RNA-4695-3p能够调控JNK1信号通路,其调控的机制可能是负反馈调节。