石榴不同部位4种多酚类成分检测方法的研究

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近年来,由于石榴中存在的众多生物活性成分,对石榴的研究与开发越来越受到全球相关领域的重视。目前,普遍认为多酚类物质是石榴中的主要生物活性成分,其中没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸等被认为是石榴多酚的主体成分,并在石榴多酚的生物活性中发挥着重要作用。但目前定量检测多酚成分的色谱方法主要针对单一成分,且只适用于石榴某一特定部位,同时检测不同部位的多种多酚的色谱方法未见报道。本研究建立了石榴的不同部位包括石榴皮、石榴汁、石榴籽、石榴叶和石榴瓤中没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸4种成分的HPLC测定方法。本文研究了石榴各部位(石榴皮、石榴汁、石榴籽、石榴叶、石榴瓤)样品前处理方法及同时适合检测没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸4种多酚的色谱条件。结果表明:石榴皮、石榴籽、石榴叶和石榴瓤经干燥粉碎后用等体积甲醇、乙醇、丙酮和水超声提取、离心后所制备的样品可采用建立的色谱方法准确检测石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量,上述样品除去有机溶剂后用乙酸乙酯萃取后可准确检测没食子酸的含量;石榴汁经冷冻干燥后超声溶于甲醇、离心后所制备的样品可采用建立的色谱方法准确检测石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量,石榴汁直接经乙酸乙酯萃取后可准确检测没食子酸的含量。样品检测的色谱条件为:选用Arcus EP-C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以甲醇(A)和0.1%TFA(B)的二元体系为流动相,采用梯度洗脱:0-10min,B98%-87%:10-20min,B87%;20-20.5min,B87%-60%;20.5-42min,B60%,流速1.0mL·min-1:柱温35℃;进样量10μL;在254nm紫外波长下检测没食子酸,石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸均在377nm紫外波长下检测。方法学考察结果表明,在本文检测的样品制备和成分检测条件下,各部位各待测成分均出现较好的特征峰,且没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸分别在0.020~0.320μg、0.038~0.608μg、0.074~1.184μg、0.039~0.624μg之间与峰面积线性关系良好,线性回归方程分别为:没食子酸y=2353.15x-17496,R=0.9997;石榴皮鞣素y=880.44x-23405.09,R=0.9971;安石榴苷y=403.18x-11971.98,R=0.9968和y=413.95x-12127.42,R=0.9978;鞣花酸y=1112.91x-18658.51,R=0.9994;检测方法的精密度、稳定性、重复性及加标回收率均达到要求,可以准确的测定石榴皮、石榴汁、石榴籽、石榴叶和石榴瓤中没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量。样品测定结果表明,石榴的五个部位中待测的4种多酚类成分石榴皮中含量最高,石榴瓤次之,石榴汁中含量最低;石榴皮中没食子酸含量最低,石榴皮鞣素和鞣花酸次之,安石榴苷含量最高,且明显高于其他三种多酚;石榴汁中没食子酸、石榴皮鞣素和鞣花酸含量相当,安石榴苷的含量最高;石榴籽中没食子酸与鞣花酸含量相差不多,未检测到石榴皮鞣素和安石榴苷;石榴叶中的鞣花酸在被检测的五个部位中含量最高。石榴瓤中安石榴苷含量较高并明显超出其他三种多酚,仅次于石榴皮中的安石榴苷。本研究所建立的石榴多酚代表性成分的HPLC方法准确、可靠,不仅可以用来比较石榴多个部位之间没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸含量的差异,同时还可以用来比较不同种类的石榴中4种多酚含量的差异,从而在一定程度上区分石榴品质的优劣,为石榴的进一步研究与开发、石榴相关产品的质量控制提供科学依据。
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