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背景与目的：在全球范围内肺癌是发病率、死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌的80-85%，吉非替尼的临床应用开启了针对非小细胞肺癌进行分子靶向药物治疗的新时代。2007年日本学者Soda等发现的棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因成为非小细胞肺癌中新的分子治疗靶点,随后针对EML4-ALK融合基因突变阳性的患者研发了一种口服抑制剂克唑替尼（crizotinib），并于2011年成为目前唯一上市的ALK抑制剂。在NSCLC患者中，因检测人群与检测方法有所不同，EML4-ALK融合基因出现的频率也不尽相同，其优势人群为年轻、非吸烟的肺腺癌患者，而且与EGFR或K-Ras基因突变相互排斥。在进行分子靶向药物治疗前利用现代分子诊断技术对特定靶点进行检测是靶向治疗的前提，同时也为靶向药物疗效预测以及个体的敏感性判断提供依据。临床上多选择手术切除或活检肿瘤组织，大多数肿瘤患者就诊时已经是晚期，无法进行手术根治切除，也就不能提供肿瘤组织来进行最新治疗靶点EML4-ALK基因检测。穿刺活检适用于一部分患者，但标本不易采集且标本量少不能提供足够肿瘤组织进行EML4-ALK基因检测。由于瘤细胞生长活动的动态性，故组织标本在反映手术、放、化疗后一段时间最新治疗靶点EML4-ALK突变真实情况方面有很大局限。因此，利用血清中脱落的肿瘤遗传物质检测EML4-ALK融合基因突变，可实现实时、动态基因检测，筛选出适合ALK抑制剂治疗的优势人群，观察突变基因的动态变化，优化临床治疗策略，提高临床疗效。qRT-PCR技术是借助荧光信号来检测PCR产物，操作简便，灵敏度高，实现多通道检测。且可以检测不同的EML4-ALK融合基因亚型及肿瘤细胞中突变细胞的丰度，更有效的指导临床治疗，易于临床广泛推广。目前，尚未见到国内外关于应用qRT-PCR检测患者血清EML4-ALK融合基因突变状态的研究，更缺乏临床配对样本的循证医学证据。为此，本研究应用qRT-PCR技术对NSCLC患者血清和肿瘤组织中的EML4-ALK融合基因突变状态进行配对检测，观察在中国人群中NSCLC患者血清及肿瘤组织的EML4-ALK融合基因突变表达率，及血清与肿瘤组织中突变的一致性，与临床特征的关系，探讨临床应用qRT-PCR技术进行实时、动态检测EML4-ALK融合基因指导临床治疗的可行性。方法：1.2012年9月至2014年01月收集北京军区总医院、山西医科大学第二附属医院、山西省肿瘤医院经病理学或细胞学确诊为非小细胞肺癌(non-small celllung cancer, NSCLC)患者血清标本123例，肺癌石蜡组织标本98例，77例石蜡组织与77例血清标本为配对标本。2.采用qRT-PCR检测123例NSCLC血清和98例NSCLC肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变，其中77例血清和肿瘤组织进行配对检测，分析血清和肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变的一致性。3.分析NSCLC患者血清和肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变状态与临床特征（性别、年龄、吸烟、病理类型、分化程度）的关系。结果：1．NSCLC患者血清和肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变情况98例肿瘤组织中检测到11例EML4-ALK融合基因突变，总体突变率11.2%（11/98）；123例血清样本中，共检测到13例EML4-ALK融合基因突变，总体突变率10.6%（13/123）。2．NSCLC患者血清和肿瘤组织EML4-ALK融合基因突变一致性在配对的77例血清和肿瘤组织样本中，检测到血清6例突变，肿瘤组织9例突变，以组织标本基因突变为标准，两者突变一致性达到66.7%（6/9），Kappa=0.779，具有较好的一致性。3．NSCLC患者血清和肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变与临床特征的关系(1)血清中EML4-ALK融合基因突变率在腺癌组高于非腺癌组（16.1%vs2.8%，p <0.05），在非吸烟组高于吸烟组（17.0%vs4.4%，p <0.05），在男女组分别为10.9%和11.5%（p>0.05），在年龄>60岁组和≤60岁组分别为8.3%和16.2%（p>0.05），在低分化组和中高分化组分别为5.7%和14.3%（p>0.05），两者差异均无统计学意义。(2)肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变率在腺癌组高于非腺癌组（14.5%vs2.5%，p <0.05），在非吸烟组高于吸烟组（16.4.%vs3.6%，p <0.05），在男女组分别为10.9%和10.2%（p>0.05），在年龄>60岁组和≤60岁组分别为10.6%和10.5%（p>0.05），在低分化组和中高分化组分别为7.3%和12.2%（p>0.05），两者差异均无统计学意义。结论：1.本研究揭示了在本组中国人群中NSCLC患者血清及肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变的表达率，分别为10.6%和11.2%，血清与肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变一致性达到66.7%，为临床应用克唑替尼治疗EML4-ALK融合基因阳性的患者提供依据。2. NSCLC患者血清和肿瘤组织EML4-ALK融合基因突变主要与腺癌和非吸烟临床特征密切相关，而与年龄、性别及分化程度无关。进一步证实中国人群中的EML4-ALK融合基因突变患者的临床特征。3.应用qRT-PCR方法可较灵敏地检测出NSCLC患者血清及肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变，且血清与肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变具有较好的一致性，利用NSCLC患者血清样本进行EML4-ALK融合基因突变的检测，具有实时性、动态性的特点，可为临床接受克唑替尼治疗的患者提供疗效预测指标。