Dickeya dadantii,原名Erwinia chrysanthemi 3937,是一种常见的欧文氏菌属的植物病原细菌,其为兼性厌氧的革兰氏阴性菌,能在适合的环境下入侵植物的根、茎、叶、花、果实等器官的木质部,其主要表症是引起植物的“软根”、“褐变”等。该病原菌可在植物的各个生长周期入侵植物,其宿主植物范围广,并不断地在扩大,其中最常见的,包括有块根的植物如马铃薯、蔬菜与水果如菜椒与番茄,及一些具有经济价值的园艺作物等。目前报道的Dickeya dadantii的毒力因子主要包括能致使植物细胞壁裂解的胞外酶类(包括一系列的果胶酶、一个纤维素酶及四个蛋白酶等)、脂多糖、胞外多糖、生物膜、铁载体、运动性、及hrpⅢ型分泌系统等,其中植物“软腐”病症是由胞外酶引发的。William Nasser(2013)等研究发现,Dickeya dadantii入侵植物时存在一个潜伏期,在细菌浓度达到一定阀值时,会引起植物病害表症的大规模出现,他们怀疑该菌的扩繁与入侵受群体感应信号影响,并以野生型病原菌的胞外酶为表型,通过Tn5插入获得了两个表型缺失可被上清液互补回来的突变体,并首次发现了一段25kb的毒力因子调控基因簇(vfm基因簇),该基因簇中含有VFM合成和调控基因,可以调控胞外酶及VFM信号的生成。但vfm基因簇产生的群体感应信号分子的结构却不明确。应William Nasser博士团队的邀请,作者所在实验室与其就Vfm群体感应信号的分离鉴定进行合作研究。本文使用在调控VFM信号合成及胞外酶表达的基因vfmE的启动子后插入uidA-Km基因簇做成的报告菌株A5243,测试VFM信号分子的活性。通过乙酸乙酯及正丁醇萃取的实验确定了VFM信号分子的极性。并使用乙醇浸提,MCI小孔树脂及凝胶分离的方法,获得VFM信号分子的粗提物。然后用正相硅胶细分离,获得相对较纯的信号分子,为进一步使用hPLC纯化和用MS及NMR鉴定出信号分子结构奠定了基础。同时,本研究揭示了一些VFM信号物理及化学的特性,如通过乙酸乙酯与正丁醇萃取的实验发现,VFM信号分子不能被乙酸乙酯萃取却能被正丁醇萃取出来,确定了VFM信号为大极性物质。再如通过不同pH,高温处理后,VFM化学性质仍然稳定,且其长时间放置后化学性质稳定,由此得知VFM信号的化学性质相对稳定。另外不同试剂及蛋白酶K处理VFM信号的实验结果表明,VFM信号被饱和EDTA溶液、甲醇及蛋白酶K处理后仍然稳定,但其能与丙酮反应。本文对VFM信号的分离及其理化性质进行了研究探讨,为VFM信号分子的纯化及结构鉴定打下了良好的基础。若VFM信号结构得以确定,不仅对Erwinia属的植物致病菌中发现新的群体感应信号有指导意义,并有可能发现新的植物致病调控机制,同时,对细菌的进化进程的研究也可以提供很好的借鉴。