【摘 要】
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目的:1.建立非酒精性脂肪肝体外细胞模型,寻找最佳造模条件;2.探索泽泻萜类单体对非酒精性脂肪肝的降脂作用,以及对细胞中降脂基因表达量的影响,进一步阐明泽泻降脂作用机制;3.建立色谱法测定泽泻四种单体含量的方法,探索肠道优势菌种乳酸杆菌对泽泻发酵后成分含量变化的影响,寻找一种提高泽泻有效萜类成分的方法。方法:1.体外细胞培养,利用棕榈酸钠(PA)和油酸钠(OA)模拟人体脂质过饱和现象,通过检测胞内
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目的:1.建立非酒精性脂肪肝体外细胞模型,寻找最佳造模条件;2.探索泽泻萜类单体对非酒精性脂肪肝的降脂作用,以及对细胞中降脂基因表达量的影响,进一步阐明泽泻降脂作用机制;3.建立色谱法测定泽泻四种单体含量的方法,探索肠道优势菌种乳酸杆菌对泽泻发酵后成分含量变化的影响,寻找一种提高泽泻有效萜类成分的方法。方法:1.体外细胞培养,利用棕榈酸钠（PA）和油酸钠（OA）模拟人体脂质过饱和现象,通过检测胞内甘油三酯含量和总胆固醇含量以及油红染色法观察脂质沉积情况,建立Hep G2非酒精性脂肪肝细胞模型;2.研究泽泻主要萜类成分单体24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇C和环氧泽泻烯对NAFLD细胞的降脂作用,同时利用蛋白免疫印迹法（WB）检测泽泻单体对细胞中Insig1以及Nr1d1基因表达量的影响;3.色谱法测定泽泻成分含量变化;4.通过单一因素探讨发酵时间、发酵菌种加入量以及发酵料液比对泽泻萜类成分含量的影响情况。结果:1.NAFLD细胞模型建立的最佳条件为:1 m M PAOA（1:2）混合液培养24 h时细胞生长抑制率低且脂质累积情况较为理想;2.在23-乙酰泽泻醇C以及环氧泽泻烯的作用下,与模型组和正常对照相比,胞内TG、TC、ALT、AST含量下降,24-乙酰泽泻醇A在本实验所用剂量范围内降脂作用不明显;3.WB显影以及灰度值分析结果表明相同造模条件下,与模型组及正常对照组相比较23-乙酰泽泻醇C、环氧泽泻烯能够提高细胞Insig1表达量,降低Nr1d1表达量,从而起到降脂作用;4.发酵单因素影响:在发酵天数为7 d时,24-乙酰泽泻醇A含量显著上升,在料液比1:10的情况下24-乙酰泽泻醇A含量显著上升,菌种加入量为5 m L时环氧泽泻烯及24-乙酰泽泻醇A含量显著上升,泽泻发酵干燥粉末经色谱法检测发现其中24-乙酰泽泻醇A以及环氧泽泻烯增长量最大。结论:1.通过1 m M PAOA（1:2）混合液培养24 h可以顺利建立NAFLD细胞模型,其中OA起到保护细胞的作用;2.泽泻单体23-乙酰泽泻醇C以及环氧泽泻烯可以对细胞起到降脂作用,阻止脂质过饱和对细胞的浸润侵害;3.泽泻单体能够提高细胞降脂通路中重要基因Insig1表达量同时降低Nr1d1基因表达量,进一步证明了泽泻的降脂作用与这两个基因靶点密切相关;4.体外乳酸杆菌发酵实验对泽泻中萜类成分影响最明显的是24-乙酰泽泻醇A和环氧泽泻烯,乳酸杆菌作为肠道优势菌种对泽泻萜类成分具有一定的影响作用,通过体外模拟体内发酵对泽泻进行处理或许能够加强泽泻体内利用率。
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