羌活鱼的化学成分及质量控制研究

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羌活鱼包括山溪鲵(Batrachuperus pinchonii)和西藏山溪鲵(Batrachuperus tibetanu),为小鲵科动物。具有治疗胃痛,骨质疏松,促进骨折愈合等功效,目前相关研究较少。  本文对羌活鱼的物种之一西藏山溪鲵的化学成分进行研究,用70%乙醇浸提得总浸膏后,分别用石油醚,乙酸乙酯,正丁醇萃取,得到不同的极性部位。采用GC-MS技术分析石油醚部位的挥发性成分,结果表明其主要成分为长链烷烃,长链烷烃乙酯,长链烯酸,长链烯酸乙酯等;综合利用硅胶色谱,薄层色谱,高效液相色谱等方法,以及核磁共振等现代波谱技术,对其乙酸乙酯部位化学成分进行系统的分离及结构鉴定,现分离得到8个单体化合物,分别为β-谷甾醇(β-sitosterol)(1),2(5H)-呋喃酮(2(5H)-Furanone)(2),尿嘧啶(uracil)(3),胸腺嘧啶(thymine)(4),脱氧尿嘧啶核苷(deoxyuridine)(5),脱氧胸腺嘧啶核苷(deoxythymidine)(6),3-吡啶甲酸(nicotinic acid)(7),邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)(8)。均为首次从西藏山溪鲵中分离得到,为西藏山溪鲵的质量研究提供良好的实验基础。  采用醋酸扭体实验法和热板法,对西藏山溪鲵的乙醇提取物的镇痛活性进行了初步研究。以体重20±2g的昆明小鼠为研究对象,随机分为阳性药组,低剂量、中剂量、高剂量和模型组。阿司匹林2mg/mL为阳性对照,给药浓度为10、20、40mg/mL,分别给药7天,第7天给药40min后测定各组小鼠扭体次数。分别于给药后的30、60、90、120min测定各组小鼠痛阀值。结果表明西藏山溪鲵给药组(20、40mg/mL)能显著减少小鼠扭体次数(P<0.05或P<0.01),且呈现出一定的剂量依赖性;但对热板法痛阀值的提高无明显作用。结果表明西藏山溪鲵仅对外周神经痛有作用,对中枢神经痛无效,从而为其镇痛活性研究奠定基础。  对羌活鱼及其混伪品无斑肥源和截趾虎的线粒体基因COI进行PCR扩增及双向测序,得到对应的COI基因序列。通过CodonCode Aligner5.0软件进行序列分析比对,根据序列差异,利用Primer Premier5.0软件设计特异性引物SJYW1和SJYW2,改变复性温度及循环数以得到特异性的反应条件。结果表明,当复性温度为54℃,25个循环时,正品羌活鱼在约350bp处有明显扩增带,而混伪品无斑肥源和截趾虎没有扩增带。本实验具有较高的特异性、重复性,可用于羌活鱼的鉴别。  根据基源鉴定结果制订了羌活鱼的 PCR鉴别法质量标准草案,为确保羌活鱼的质量提供了科学依据。
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