特异性沉默EBV潜伏期基因BHRF1pSUPER retro RNAi系统的构建和初步应用

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EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是重要的DNA致瘤病毒,与多种人类恶性肿瘤如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌(NPC)、何杰金氏病、免疫缺陷病人的B淋巴细胞瘤、T淋巴细胞瘤、胃癌及肝癌等的发生有关。研究表明在EBV相关肿瘤组织中,EBV只感染癌细胞而不感染正常细胞,而EBV阳性癌组织中,EBV基因组存在于几乎所有的癌细胞中,提示EBV可能是治疗EBV阳性肿瘤的理想靶点,因此可以利用EBV阳性肿瘤细胞与正常细胞的差异,采用适当方法选择性地杀伤EBV阳性的肿瘤细胞。肿瘤组织中EBV主要以潜伏感染的形式存在,不同EBV相关肿瘤组织中病毒潜伏感染状态不同,所表达的癌基因也不完全相同。EBV潜伏膜蛋白基因LMP1和核抗原基因EBNA2是公认的导致细胞恶性转化的病毒癌基因。EBNA2为EBV转化B淋巴细胞过程中最早表达的病毒编码蛋白,通过增强细胞周期素D2的转录而活化细胞周期,并能增强LMP1对原癌基因bc1-2表达的诱导作用。LMP1高水平表达可诱发细胞癌变,在B淋巴细胞的体外转化中起重要作用,还可抑制人上皮细胞的分化,诱导人上皮细胞和大鼠细胞在裸鼠体内形成肿瘤,并可通过激活A20基因阻断p53介导的细胞凋亡,但某些EBV阳性肿瘤中检测不到LMP1的表达。近年来EBV早期基因BHRF1的致癌作用亦逐渐受到关注。BHRF1是EBV裂解早期表达的蛋白,位于EBV基因组第54376至54951位核苷酸区域,全长576bp,开放读码框有191个密码子,编码17kDa的蛋白质,属于Bc1-2家族。BHRF1与细胞原癌基因bc1-2的序列具有高度同源性,同源序列主要集中在两者的BH1、BH2区和C末端。实验表明BHRF1除具有与bc1-2相似的抑制B淋巴细胞和上皮细胞凋亡的作用外,又具有bc1-2所没有的促进细胞生长
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