苓桂术甘汤出自张仲景所著《伤寒杂病论》,是我国古代经典名方之一,具有温阳化饮,健脾利湿之功效,主治中阳不足之痰饮,临床上治疗心力衰竭疗效确切。药理学研究表明,苓桂术甘汤可显著改善心力衰竭的症状。然而,苓桂术甘汤中哪些物质发挥治疗心力衰竭的作用,目前尚不明确。目的:通过多方法整合策略研究苓桂术甘汤治疗心力衰竭的药效物质基础。方法:整合体内物质鉴定、非靶向代谢组学、靶点筛选、分子对接和体外细胞实验等多种方法。1.体内物质鉴定。采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱（UHPLC-Q-TOF-MS/MS）方法,鉴定灌胃给予苓桂术甘汤后正常小鼠和多柔比星诱导的心力衰竭模型小鼠的血清、尿液、粪便样品中的原型物质。2.非靶向代谢组学。将小鼠分为五组:正常组、多柔比星诱导的心力衰竭组、低、中、高浓度苓桂术甘汤给药组（即L-lgzgt组、M-lgzgt组和H-lgzgt组）。取各组心脏组织样品加甲醇-水（4:1,v/v）匀浆,高速离心后取上清液供测定。采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术进行心脏组织非靶向代谢组学分析,原始质谱数据经QI、SIMCA等软件进行处理。3.靶点筛选。通过TCMSP数据库、Pub Chem数据库和Swiss Target Prediction数据库筛选苓桂术甘汤中进入小鼠体内原型物质对应的靶点;通过Drug Bank数据库和TTD数据库筛选心力衰竭疾病对应的靶点;通过KEGG数据库、Cytoscape软件、HMDB数据库、Swiss Target Prediction数据库经非靶向代谢组学筛选内源性差异代谢物对应的靶点。将以上三种靶点取交集,筛选出苓桂术甘汤中物质治疗心力衰竭的共有靶点。根据共有靶点筛选对应的苓桂术甘汤中物质。4.分子对接。通过Uni Prot数据库和PDB数据库获取共有靶点的蛋白结构;通过Pub Chem数据库获取苓桂术甘汤中物质的化学结构。将这两者通过Autodock Vina软件进行分子对接。5.体外细胞实验。选取19种苓桂术甘汤中进入小鼠体内的物质,包括甘草苷、肉桂醛、肉桂酸、甘草次酸、茯苓酸B、香豆素、山奈酚、阿魏酸、大豆苷元、儿茶素、咖啡酸、茯苓酸、白术内酯I、白术内酯III、松苓新酸、去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓新酸AM和京尼平苷,分别研究低、中、高浓度的各物质拮抗多柔比星诱导的H9c2细胞损伤的作用。结果:给予苓桂术甘汤后,正常小鼠和模型小鼠血清、尿液、粪便样品共鉴定出42种原型物质。小鼠心脏组织非靶向代谢组学研究共鉴定出55种内源性差异代谢物。靶点筛选方法筛选出33个苓桂术甘汤治疗心力衰竭的共有靶点,以及对应的25种苓桂术甘汤中物质。分子对接技术进一步筛选出苓桂术甘汤治疗心力衰竭的22种物质。细胞实验表明,肉桂醛、甘草次酸、山奈酚、大豆苷、咖啡酸和儿茶素能显著提高H9c2细胞的存活率。结论:本研究通过整合体内物质鉴定、非靶向代谢组学、靶点筛选、分子对接等方法筛选出苓桂术甘汤中22种药效物质。体外细胞实验首次证实了苓桂术甘汤中肉桂醛、甘草次酸、山奈酚、大豆苷元、咖啡酸和儿茶素具有保护H9c2细胞的作用。