子宫内膜炎是一种多病因疾病,在发展中国家的乳制品行业中,其发生率高达35-45%,因此对农场经济和健康的动物的最佳生殖潜力影响是一个重要的挑战。在病原体中,金黄色葡萄球菌（S.aureus）和大肠杆菌（E.coli）被认为是牛子宫疾病的最主要原因。由于抗生素在奶牛中的大量使用,乳制品中的药物残留已成为消费者最为关注的问题,而新的耐药性致病变异菌正在不断产生,为全球动物和人类健康安全提出了更大的挑战。本论文旨在研究子宫内膜炎细菌病因的常规分子流行病学模式,以及抗生素组合的使用提供更加有效的治疗方案,以强调在特定领域轮流使用抗生素的重要性。试验一旨在评估牛子宫样本中金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的流行规律以及相关风险因素。对来自巴基斯坦旁遮普省Khanewal区及其周边地区的不同商业奶牛场的n=304产后奶牛进行超声筛查后,在无菌条件下获得子宫冲洗液。现场填写预先设计的问卷,以收集有关危险因素的数据。对样品进行微生物和生化处理以分离金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。研究结果显示子宫内膜炎的患病率为43.75%。通过微生物测定以鉴定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。通过分析mec A基因进一步证实了金黄色葡萄球菌。实验发现,子宫内膜炎样本含有金黄色葡萄球菌和大肠杆菌概率分别为78.19%和72.18%。风险因素分析表明,产犊历史、产奶量/天、产奶天数、胎次和喂养方式是子宫内膜炎传播的重要风险因素。本试验说明这两种病原体在牛子宫内膜炎中的流行率高,并且在设计预防策略时需要考虑的重要风险因素数量增加。试验二是对先前收获的分离株进行分子构象和遗传分析。该实验旨在寻找该病原体的可能传播途径以及与报道的分离株的差异。还确定了抗生素敏感性谱以发现对多种抗生素的耐药谱。金黄色葡萄球菌的分子确认是通过靶向Nuc基因完成的。大肠杆菌的分子确认是通过PCR扩增23S r RNA基因。使用不同的生物信息学工具分析本地分离株的测序结果。使用BLAST检查分离株与参考NCBI菌株的核苷酸相似性。使用MEGAX软件构建核苷酸序列的系统发育树,Gene structure display server 2.0用于结构分析,使用STRING软件（用于检索相互作用基因/蛋白质的搜索工具）确定蛋白质-蛋白质相互作用。使用圆盘扩散法,按照抗生素敏感性的标准方案,测试金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分离株对各种抗生素的易感性。本地分离的S.aureus Nuc基因（SA-1、SA-2和SA-3）序列与从Bos taurus和猪肉中分离的S.aureus Nuc基因密切相关。在金黄色葡萄球菌（78.19%）中,MRSA的平均流行率为26.92%（范围为0%-42.86%）。金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性顺序为甲氧苄啶-磺胺甲恶唑>环丙沙星≥恩诺沙星≥氯霉素>庆大霉素>左氧氟沙星>利奈唑胺>万古霉素>夫西地酸。核苷酸分析表明,本地大肠杆菌分离株的23S r RNA核苷酸序列与大肠杆菌参考菌株的核苷酸序列具有98%的相似性。发现当地大肠杆菌分离株的23S r RNA基因核苷酸序列与人直肠拭子（老挝）的大肠杆菌分离株密切相关,并与人尿（美国）、猪肝（中国）、乳粪（加拿大）、人粪（新加坡）、鸡肉内条（罗马尼亚）、人尿（中国）、人（西班牙）和猪粪（加拿大）分离的大肠杆菌聚集在一起。在23S r RNA基因序列的不同位置鉴定了五个基序。所有五个序列的P值（2.49e-100）都相同。大肠杆菌对不同抗生素的耐药性依次为“夫西地酸>万古霉素>左氧氟沙星>利奈唑胺>头孢西丁>庆大霉素,≥恩诺沙星>环丙沙星≥甲氧苄啶-磺胺甲恶唑≥氯霉素”。该研究得出结论,子宫内膜炎起源的目标病原体有着较高的抗性编码基因和改变的抗生素敏感谱,以及进化遗传模式和系统发育关联。因此,这项研究引起了人们对新出现的引起子宫内膜炎的耐药菌株的关注,而抗生素的使用则是在轮换的基础上进行的。试验三测试了各种抗生素/药物组合使用,以确保有效组合来治疗牛子宫内膜炎。为此,采用良好扩散试验作为主要的体外试验,然后采用肉汤微量稀释法确定抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的协同组合。在体外试验的基础上,对大肠杆菌子宫内膜炎和金黄色葡萄球菌子宫内膜炎进行了现场试验。体外研究表明,与其他抗金黄色葡萄球菌的药物相比,甲硝唑和庆大霉素的抑菌圈（ZOI）显示出显着差异（p<0.05）。琼脂孔扩散法的药物组合分析表明,与土霉素相比,土霉素与链霉素组合的抑制区增加最大（188.89%）。类似地,与到组合中前列药物的ZOI相比,阿莫西林+庆大霉素、恩诺沙星+阿莫西拉、甲硝唑+阿莫西拉、庆大霉素+阿莫西林和链霉素的组合分别使ZOI增加113.33、108.33、91.67、60和42.11%。对所有受试药物组合对耐药金黄色葡萄球菌分离株的协同试验显示出组合的协同行为;阿莫西林与庆大霉素和甲硝唑与恩诺沙星联合使用起到协同作用,而土霉素与阿莫西林、甲硝唑和恩诺沙星的组合则观察到拮抗作用。在阿莫西林与恩诺沙星和链霉素的组合中发现了累加效应;co-amoxiclav与恩诺沙星和庆大霉素;和恩诺沙星与庆大霉素,而其余组合被确定为无差异。该研究指出,在使用Genta+Enro、单独庆大霉素、Co-amoxiclav+庆大霉素和土霉素以及Metro+Enro组合的情况下,在子宫壁的恢复/愈合方面的康复率最高,成功率分别为100%、100%、69.23%、57.14%和33.33%。琼脂孔扩散法的药物组合分析表明,土霉素co-amoxiclav组合的抑制区增加最大（162.5%）,而甲硝唑+土霉素+甲硝唑组合的抑制区分别增加了133.33、100、87.5、75、66.67和62.5%。co-amoxiclav,土霉素+恩诺沙星,土霉素+甲硝唑,甲硝唑+恩诺沙星,土霉素+庆大霉素。所有受试药物的最低抑菌浓度彼此之间存在显着差异,并按以下顺序记录,“恩诺沙星<庆大霉素<co-amoxiclav<链霉素<阿莫西林<甲硝唑<土霉素”。研究发现所有菌株对恩诺沙星和庆大霉素敏感。针对大肠杆菌分离株的所有测试药物组合的协同试验显示没有协同作用,而观察到恩诺沙星和土霉素的组合具有拮抗作用。观察到阿莫西林与庆大霉素和链霉素的组合以及阿莫西拉夫与庆大霉素和阿莫西林组合具有累加效应;而其余组合则无显著差异。现场试验表明,以子宫壁正常化和妊娠建立为代表治疗成功率,发现庆大霉素+恩诺沙星（100%）、单独庆大霉素（100%）、阿莫西拉夫+庆大霉素（84.61%）、单独土霉素（78.57%）和甲硝唑+恩诺沙星（33.33%）的康复率最高。另一方面,阿莫西林+链霉素、阿莫西林+甲硝唑和阿莫西林+庆大霉素分别显示15.33%、10.50%和9.50%的治疗成功率,现场试验的成功率表明大肠杆菌之间的反应与体外反应的反应不同。论文制订了目标牛群子宫内膜炎的体外和体内治疗方案,并产生了有效的结果。在试验过程中,特别谨慎地遵循药物剂量和药物组合惯例。在存在以下任何指标时评估成功率:i)通过超声检查证实子宫内膜炎得到缓解;ii)没有细菌负荷阴道/子宫分泌物;iii)或成功受孕。治疗后进行超声检查以发现子宫壁正常化。此外,在动物的外阴没有以分泌物形式可见的临床症状,且子宫样本中没有目标微生物的生长。论文通过解决常用抗生素的体外和体内参数来标准化奶牛子宫内膜炎的治疗方案,该研究还建议轮流使用抗生素,并额外关注多种细菌病因,以找到复杂病例的优化的治疗方案,对预防和治疗牛子宫内膜炎提供了参考。