藤黄微球菌MTSase、MTHase基因的克隆与表达

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海藻糖(Trehalose)是一种天然糖类,广泛存在于自然界的动物、植物、和微生物等各种生命体中。由于海藻糖是由特殊双糖分子构成的非还原性糖,特性非常稳定,能够在高温、高寒、干燥失水等恶劣的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜,有效的保护生物分子结构不被破坏,从而维持生命体的生命过程和生物特征,因而被称为“生命之糖”。现已被广泛用于食品、医药、化妆品及农业科学等各个行业。 现有的海藻糖生产方法有很多种,如发酵法,酶转化法,基因工程法等。本课题研究的一株藤黄微球菌(Micrococcusluteus)能高产低聚麦芽糖苷基海藻糖合成酶(MTSase)、水解酶(MTHase),并且能将淀粉水解物转化成海藻糖。作者采取鸟枪法和PCR方法得到了该菌株中编码MTSase的全序列基因(MtreY)及MTHase基因(MtreZ)的部分序列,序列分析显示MtreY共有2370个碱基,编码790个氨基酸,表达产物分子量为86.7KDa,与已报道的MTSase基因有较高的同源性。将MtreY基因在大肠杆菌JM83及BL21(DE3)中分别表达,并进行酶活测定,确定所克隆的基因编码低聚麦芽糖苷基海藻糖合成酶(MTSase)。由于该基因在该菌株中是首次被克隆,并且有助于利用基因工程的方法构建高产海藻糖的工程菌,因而这些研究具有较高的理论价值和广泛的应用前景。
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