论文部分内容阅读
生长抑素(SS)是由下丘脑分泌的一种含14个氨基酸残基的短肽类激素,其主要生理作用是抑制生长激素的分泌。
本研究主要工作及结果如下:
1.构建了pET-32a-ss表达质粒,转化大肠杆菌BL21(BE3),用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测表明,ss基因在大肠杆菌中实现了融合表达,蛋白分子量约为23.4 KD。
2.用疫苗“激生1号”免疫日本大耳兔获得抗生长抑素血清,饱和硫酸铵粗提IgG,再经DEAE-sephadex-A50低压层析系统纯化IgG,最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度,并用放射免疫法检测SS抗体的含量。以纯化后的SS IgG作为筛选配基,用蛋白竞争洗脱法结合阴性血清吸附的方法,对噬菌体随机12肽库进行了四轮淘洗,随机挑取22个蓝色噬菌斑扩增后,用ELISA初步鉴定,发现有6个噬菌斑克隆与SS抗体有较强的特异性结合,通过进一步的竞争抑制ELISA,仍有较好的抑制效果。将该6个阳性克隆提取ssDNA进行测序与分析,结果中有5个阳性克隆的外源肽序列完全一致,与SS氨基酸序列进行比对,得到同源序列FWK。