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目的皮瓣移植是修复组织缺损最常用的方式,皮瓣移植术后最常面临的一个问题是血管痉挛,而顽固性的血管痉挛将严重影响移植物的血运循环,造成局部缺血或瘀血,进行性的导致皮瓣坏死。因此解决皮瓣移植术后的血管痉挛进而提高皮瓣存活率是一个有着重要临床意义的课题。研究如何解决重建术后血管痉挛的着手点是筛选最佳解痉挛药物,通过局部用药的方式,观察多种药物对痉挛血管的灌注影响。本课题以SD大鼠作为研究对象,首先建立两种血管痉挛的模型,在模型上分别筛选出能够减少痉挛持续时间、形成超灌注的最佳解痉药物,并初步探讨其解痉机制。随后把两种血管痉挛模型筛选出的最佳解痉药物所涉及的解痉关键蛋白抑制剂应用于皮瓣移植术,观察术后皮瓣血流灌注量、皮瓣存活率、痉挛相关蛋白(Rho A和CPI-17α(T38))的影响。方法1.建立去甲肾上腺素诱发的神经源性股动静脉痉挛模型,利用激光散斑衬比成像仪(LSCI)记录其基础灌注值,诱发痉挛后记录其痉挛灌注值,随后分别施加7种常见的血管扩张剂,生理盐水作对照组,计算出痉挛持续时间和超灌注时间。选择解痉效果最好的两种药物,在术后3天取股动脉进行免疫荧光及蛋白印迹分析,检测Rho A和CPI-17Aα(T38)蛋白的表达情况。2.建立机械诱发的肌源性股动静脉痉挛模型,利用LSCI记录其基础灌注值,诱发痉挛后记录其痉挛灌注值,随后分别施加9种常见的血管扩张剂,生理盐水作对照组,计算出痉挛持续时间和超灌注时间。选择解痉效果最好的两种药物,在术后3天取股动脉进行免疫荧光及蛋白印迹分析,检测Rho A和CPI-17Aα-(T38)蛋白的表达情况。3.取24只SD大鼠,随机分成三组(基础组、生理盐水组和抑制剂组)。首先建立大鼠背部皮瓣模型(3×9cm),在皮瓣掀起后分别局部施加生理盐水和抑制剂(法舒地尔),基础组并不进行任何手术操作。术后3天观察生理盐水组和法舒地尔组皮瓣存活率及Choke I、II区的血流灌注量。术后7天取Choke II区皮瓣进行免疫荧光及蛋白印迹分析,检测Rho A和CPI-17Aα-(T38)蛋白的表达情况。结果1.去甲肾上腺素诱发的股动静脉痉挛模型研究结果显示:(1)股动脉痉挛后,其血流量下降了约92%,在应用7种药剂后,2%利多卡因一直处于痉挛状态。就缩短动脉血管痉挛持续时间的功效而言,其余7种药物可分为:硝普钠=前列腺素E1﹤酚妥拉明=罂粟碱﹤10%硫酸镁﹤维拉帕米﹤生理盐水。仅有硝普钠和前列腺素E1达到超灌注状态,且前者超灌注时间显著较短(P<0.001);(2)股静脉痉挛后,其血流量下降了约73%,就缩短静脉血管痉挛持续时间的功效而言,7种药物可分为:前列腺素E1=硝普钠﹤罂粟碱=10%硫酸镁=酚妥拉明﹤维拉帕米﹤生理盐水。从超灌注时间来看,仅有前列腺素E1、硝普钠和罂粟碱达到超灌注状态,而前列腺素E1的超灌注时间均数短于其余两组(P<0.001);(3)术后3天取硝普钠和前列腺素E1组的股动脉进行免疫荧光和蛋白印迹分析。结果显示基础组血管表达少量Rho A,主要集中在血管平滑肌层,在滴加NE后,血管平滑肌层Rho A表达显著升高(P<0.001),施加硝普钠或前列腺素E1后,其表达水平显著降低(P<0.001)。CPI-17α(T38)的表达趋势与Rho A相似,NE组与基础组相比,CPI-17α(T38)蛋白水平显著升高,添加SNP和PGE1后,其蛋白表达水平显著下降(P<0.001)。2.机械诱发的肌源性股动静脉痉挛模型研究结果显示:(1)钝性剥离后股动脉灌注下降约88%。9种解痉药的解痉时间与生理盐水组比较,均显著缩短(P<0.001)。就缩短动脉痉挛时间而言,10种药物分别为:10%硫酸镁=12%利多卡因<氨力农=硝普钠<罂粟碱=酚妥拉明=2%利多卡因<维拉帕米<生理盐水<前列腺素E1<生理盐水。10%硫酸镁组和12%利多卡因组痉挛持续时间最短,两组比较无显著性差异(P=0.206)。只有10%硫酸镁和12%利多卡因可导致超灌注。前者灌注时间为620±29s,明显短于后者(1142±45s)(P<0.001);(2)钝性剥离后股静脉灌注下降约88%。除前列腺素E1组外,其余各组的痉挛持续时间均明显缩短(P<0.001),前列腺素E1组的痉挛持续时间与对照组相比无统计学差异(P=0.495)。就缩短静脉痉挛持续时间而言,10种药物的解痉挛效果依次为:10%硫酸镁=12%利多卡因<氨力农=酚妥拉明<罂粟碱<2%利多卡因=维拉帕米=硝普钠<前列腺素E1=生理盐水。10%硫酸镁与12%利多卡因无显著性差异(P=0.722)。仅有10%硫酸镁可以达到达到超灌注(1100±22s);(3)术后三天取硝普钠和前列腺素E1组的股动脉进行免疫荧光和蛋白印迹分析。结果显示基础组血管表达少量Rho A,主要集中在血管平滑肌层,在血管钝性剥离手术操作后,血管平滑肌层Rho A表达显著升高(P<0.005),施加10%硫酸镁或12%利多卡因后,其表达水平显著降低(P<0.001)。CPI-17α(T38)的表达趋势与Rho A相似,手术组与基础组相比,CPI-17α(T38)蛋白水平显著升高,添加10%硫酸镁或12%利多卡因后,其蛋白表达水平显著下降(P<0.001)。3.Rho激酶抑制剂法舒地尔应用于皮瓣移植研究显示:(1)生理盐水组的皮瓣存活率69.4±14.2%,法舒地尔组的皮瓣存活率为93.1±4.0%,法舒地尔组的皮瓣存活率显著高于生理盐水组(P=0.002);(2)皮瓣Choke I:生理盐水组的平均血流灌注量28.1±8.7U,法舒地尔组的平均血流灌注量为56.6±10.7U,法舒地尔组的平均血流灌注量显著高于生理盐水组(P<0.001)。Choke II:生理盐水组的平均血流灌注量16.4±5.4U,法舒地尔组的平均血流灌注量为39.3±7.8U,法舒地尔组的平均血流灌注量显著高于生理盐水组(P<0.001);(3)与基础组相比,生理盐水组Rho A和CPI-17α(T38)表达水平显著升高(P=0.003,P<0.001)。与生理盐水组相比,法舒地尔组的Rho A和CPI-17α(T38)水平明显降低(P=0.047,P=0.004)。结论神经源性血管痉挛的最佳解痉剂为硝普钠和前列腺素E1;肌源性血管痉挛的最佳解痉剂为10%硫酸镁和12%利多卡因。Rho激酶抑制剂法舒地尔应用于皮瓣移植术,可显著提高血流灌注和皮瓣存活率。