【摘 要】
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急性肝损伤作为临床常见问题之一，受到了广大医学工作者的长期关注。其基本病理过程为肝细胞的大量损伤和肝功能的下降。急性肝功能损伤过程如果不加以控制，则有可能导致会导致
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急性肝损伤作为临床常见问题之一，受到了广大医学工作者的长期关注。其基本病理过程为肝细胞的大量损伤和肝功能的下降。急性肝功能损伤过程如果不加以控制，则有可能导致会导致肝损伤的进一步加重，致使损伤的迁延不愈，形成慢性肝损伤乃肝硬化；更有甚者，短期内肝脏损伤程度大大超过肝脏代偿能力，导致暴发性肝衰竭的发生，严重危害患者生命健康。 急性肝损伤的发病机制现阶段尚未完全阐明，但巨噬细胞作为机体免疫系统的重要组分参与了整个损伤的过程，并在不同阶段发挥出截然不同的生物学作用。Kv1.3是电压门控的钾离子通道，已有多项研究证明其在免疫调节中的重要作用。本实验室前期研究发现，巨噬细胞膜上也分布着大量的Kv1.3离子通道。阻断Kv1.3和/或影响其表达势必会对巨噬细胞功能产生影响其中就包括巨噬细胞本身的迁移能力。因此，本研究的主要科学假说为—Kv1.3通过抑制巨噬细胞迁移能力阻碍巨噬细胞招募，进而减轻急性肝损伤。为了验证科学假说及进一步探究其可能机制，我们设计了以下实验： 1.建立LPS/D-GaIN联合诱导急性肝损伤模型，同时给予MgTX干预观察其损伤变化 LPS的D-GaIN联合诱导的急性肝损伤模型建立成功，模型组肝脏病理学、血清学指标均较对照组上升，差异具有统计学意义。同时使用了Kv1.3特异性阻滞剂后，肝损伤指标减轻。单独运用Kv1.3阻滞剂对小鼠本身未产生不良影响。 2.检测急性肝损伤过程中巨噬细胞招募情况 针对小鼠腹腔巨噬细胞的涂片和对肝脏的CD68免疫组化染色，结果发现L/D组小鼠，腹腔巨噬细胞大量渗出。同时，肝内巨噬细胞比例增高。提示大量单核细胞来源的巨噬细胞被招募至肝脏。而MgTX处理后，腹腔巨噬细胞渗出减少，招募至肝脏的炎性巨噬细胞相对应减少。 3.体外探究MgTX对巨噬细胞迁移能力的影响 当使用MgTX 10nM处理后，无论是划痕实验还是Transwell实验都提示Raw264.7细胞的迁移能力受到了抑制，差异具有统计学意义。 4.体外探究MgTX对Kv1.3表达水平的影响 采用MgTX 10nM处理后，Raw264.7细胞的Kv1.3蛋白水平和mRNA水平均未发生明显变化，免疫荧光结果同样证实了上述结果。提示MgTX对于Kv1.3的影响并非通过影响其表达水平来实现。 5.通过沉默或过表达Kv1.3辅证其生物学功能 为了证实Kv1.3对巨噬细胞迁移功能的影响，我们沉默和过表达了Kv1.3蛋白。结果显示沉默Kv1.3后，巨噬细胞迁移能力明显下降。过表达Kv1.3后，巨噬细胞迁移能力增加。 通过我们的实验得出：Mtgx可以抑制巨噬细胞迁移能力，减少其在炎症初期的招募减轻肝脏损伤。巨噬细胞的迁移能力可以被Kv1.3表达变化所调控。
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